NextSeq 550 ஐப் பயன்படுத்தி Olink வரிசைமுறையை ஆராயுங்கள்

அறிமுகம்

நோக்கம் கொண்ட பயன்பாடு
Olink® Explore என்பது மனித புரத பயோமார்க்கர் கண்டுபிடிப்புக்கான மல்டிபிளக்ஸ் இம்யூனோஅசே தளமாகும். தயாரிப்பு ஆராய்ச்சி பயன்பாட்டிற்காக மட்டுமே வடிவமைக்கப்பட்டுள்ளது, மற்றும் கண்டறியும் நடைமுறைகளில் பயன்படுத்தப்படாது. ஆய்வகப் பணிகள் பயிற்சி பெற்ற ஆய்வக ஊழியர்களால் மட்டுமே நடத்தப்படும். பயிற்சி பெற்ற பணியாளர்களால் மட்டுமே தரவு செயலாக்கம் மேற்கொள்ளப்படும். முடிவுகள் மற்ற மருத்துவ அல்லது ஆய்வக கண்டுபிடிப்புகளுடன் இணைந்து ஆராய்ச்சியாளர்களால் பயன்படுத்தப்பட வேண்டும்.

இந்த கையேடு பற்றி
இந்த பயனர் கையேடு Illumina® NextSeq™ 550 இல் Olink® Explore Libraries வரிசைப்படுத்த தேவையான வழிமுறைகளை வழங்குகிறது. வழிமுறைகள் கண்டிப்பாகவும் வெளிப்படையாகவும் பின்பற்றப்பட வேண்டும். ஆய்வகப் படிகள் முழுவதும் ஏதேனும் விலகல்கள் குறைபாடுள்ள தரவுகளுக்கு வழிவகுக்கும். ஆய்வகப் பணியைத் தொடங்குவதற்கு முன், Olink® Explore Over ஐப் பார்க்கவும்view இயங்குதளத்தை அறிமுகம் செய்வதற்கான பயனர் கையேடு, வினைப்பொருட்கள் பற்றிய தகவல்கள், உபகரணங்கள் மற்றும் தேவையான ஆவணங்கள், ஒரு ஓவர்view பணிப்பாய்வு, அத்துடன் ஆய்வக வழிகாட்டுதல்கள். Olink® Explore Reagent Kits எவ்வாறு இயக்குவது என்பது குறித்த வழிமுறைகளுக்கு, பொருந்தும் Olink® Explore User Manual ஐப் பார்க்கவும். Olink® Explore வரிசை முடிவுகளின் தரவு செயலாக்கம் மற்றும் பகுப்பாய்வுக்கு, Olink® MyData கிளவுட் பயனர் வழிகாட்டியைப் பார்க்கவும். இந்த உள்ளடக்கத்தில் உள்ள அனைத்து வர்த்தக முத்திரைகள் மற்றும் பதிப்புரிமைகள் Olink® Proteomics AB இன் சொத்து, வேறுவிதமாகக் கூறப்படாவிட்டால்.

தொழில்நுட்ப ஆதரவு
தொழில்நுட்ப ஆதரவுக்கு, Olink Proteomics இல் தொடர்பு கொள்ளவும் support@olink.com.

ஆய்வக வழிமுறைகள்

NextSeq™ 550/500 High Output Kit v550 (2.5 Cycles) ஐப் பயன்படுத்தி NextSeq™ 75 இல் Olink நூலகங்களை எவ்வாறு வரிசைப்படுத்துவது என்பது குறித்த வழிமுறைகளை இந்த அத்தியாயம் வழங்குகிறது. வரிசைப்படுத்துவதற்குப் பயன்படுத்தப்படும் நெறிமுறை Illumina® NextSeq™ 550க்கான Illumina® நிலையான NGS பணிப்பாய்வுகளின் தழுவலாகும். வரிசைப்படுத்துவதற்கு முன், சுத்திகரிக்கப்பட்ட நூலகத்தின் தரம் சரிபார்க்கப்பட்டதா என்பதை உறுதிப்படுத்தவும். தரக் கட்டுப்பாடு பற்றிய வழிமுறைகளுக்குப் பொருந்தும் Olink Explore User Manual ஐப் பார்க்கவும்.

வரிசைமுறை ஓட்டத்தைத் திட்டமிடுங்கள்
ஒரு Olink நூலகத்தை NextSeq™ 550 உயர் வெளியீட்டு ஓட்டம் செல் மற்றும் ஒரு ஓட்டத்திற்கு வரிசைப்படுத்தலாம். வெவ்வேறு Olink Explore Reagent Kits வரிசைப்படுத்த தேவையான உயர் வெளியீட்டு ஓட்டம் செல்கள் மற்றும் ரன்களின் எண்ணிக்கை அட்டவணை 1 இல் விவரிக்கப்பட்டுள்ளது. ஒன்றுக்கு மேற்பட்ட ரன் தேவைப்பட்டால், இந்த கையேட்டில் விவரிக்கப்பட்டுள்ள வழிமுறைகளை மீண்டும் செய்யவும்.

அட்டவணை 1. வரிசைப்படுத்துதல் ரன் திட்டமிடல்:

Olink® Explore Reagent Kit	ஒலிங்க் நூலகங்களின் எண்ணிக்கை	ஓட்டம் செல்(கள்) மற்றும் ரன்(கள்) எண்ணிக்கை
Olink® Explore 384 Reagent Kit	1	1
Olink® Explore 4 x 384 Reagent Kit	4	4
Olink® Explore 1536 Reagent Kit	4	4
Olink® எக்ஸ்ப்ளோர் எக்ஸ்பான்ஷன் ரீஜென்ட் கிட்	4	4
Olink® Explore 3072 Reagent Kit	8	8

Olink® தனிப்பயன் செய்முறையை நிறுவவும்
இந்த படிநிலையின் போது, ​​Olink® தனிப்பயன் செய்முறையானது NextSeq™ 550 இல் நிறுவப்பட்டுள்ளது. முதல் முறையாக Olink வரிசைமுறை இயக்கம் செய்யப்படுவதற்கு முன், இந்தப் படி ஒருமுறை மட்டுமே செய்யப்பட வேண்டும்.
குறிப்பு: Olink தனிப்பயன் செய்முறையானது NextSeq™ 500/550 உயர் வெளியீட்டு கருவிகள் மற்றும் NextSeq™ கட்டுப்பாட்டு மென்பொருள் 4.0 உடன் மட்டுமே வேலை செய்யும்

1. Olink தனிப்பயன் செய்முறை Olink_NSQ550_HighOutput_V1 ஐ அன்ஜிப் செய்து, NextSeq™ 550 கருவியின் பின்வரும் கோப்புறையில் வைக்கவும்: C:\Program Files\Illumina\NextSeq கட்டுப்பாட்டு மென்பொருள்\ செய்முறை \ தனிப்பயன் \ உயர் \.
2. சிஸ்டம் தனிப்பயனாக்கம் > கருவியை நிர்வகித்தல் என்பதன் கீழ், தனிப்பயன் ரெசிபிகளை இயக்கவும். தேர்ந்தெடுக்கப்படவில்லை என்றால், ரன் அமைப்பின் போது தனிப்பயன் செய்முறை விருப்பம் தோன்றாது.

குறிப்பு: NCS 4.0 மென்பொருள் பதிப்பில், தனிப்பயன் செய்முறையைத் தேர்ந்தெடுப்பதற்கான விருப்பம், ரீஜென்ட் கார்ட்ரிட்ஜ் ஏற்றப்பட்ட பிறகு மட்டுமே ஏற்படும், முந்தைய அமைவுப் பக்கத்தில் அல்ல.
குறிப்பு: தனிப்பயன் ரெசிபிகளை அனுமதிக்க ரன் கையேடு பயன்முறையில் அமைக்கப்பட வேண்டும்.

வரிசைப்படுத்துதல் உலைகளைத் தயார் செய்யவும்

இந்த படிநிலையின் போது, ​​க்ளஸ்டரிங் மற்றும் சீக்வென்சிங் ரியாஜெண்டுகளைக் கொண்ட ரியாஜென்ட் கார்ட்ரிட்ஜ் கரைக்கப்பட்டு, ஃப்ளோ செல் தயாரிக்கப்படுகிறது.

மறுஉருவாக்கம் கெட்டி தயார்
எச்சரிக்கை: ரியாஜெண்ட் கார்ட்ரிட்ஜில் அபாயகரமான இரசாயனங்கள் உள்ளன. போதுமான பாதுகாப்பு உபகரணங்களை அணியுங்கள் மற்றும் பொருந்தக்கூடிய தரநிலைகளின்படி பயன்படுத்தப்பட்ட வினைகளை நிராகரிக்கவும். மேலும் தகவலுக்கு, Illumina NextSeq 550 கணினி வழிகாட்டியைப் பார்க்கவும் (ஆவணம் #15069765).

பெஞ்ச் தயார்

• 1x NextSeq™ 500/550 High Output Reagent Cartridge v2 (75 சுழற்சிகள்).

வழிமுறைகள்

1. உறைந்த ரியாஜென்ட் கார்ட்ரிட்ஜை அறைக் குளிரூட்டப்பட்ட நீரில் பாதியளவு மூழ்க வைத்து 1 மணி நேரம் கரைய விடவும். தோட்டாக்களின் அனைத்து மறுஉருவாக்கம் நீர்த்தேக்கங்களும் முற்றிலும் கரைக்கப்படுவதை உறுதிசெய்க.
   குறிப்பு: வசதிக்காக, கெட்டியை முந்தைய நாள் கரைத்து, இரவு முழுவதும் 4 °C வெப்பநிலையில் சேமிக்கவும். இந்த வெப்பநிலையில், எதிர்வினைகள் ஒரு வாரம் வரை நிலையாக இருக்கும்.
2. ஒரு காகித துண்டுடன் கெட்டியின் அடிப்பகுதியை நன்கு உலர வைக்கவும், தேவைப்பட்டால், பஞ்சு இல்லாத துணியால் படல முத்திரைகளை உலர வைக்கவும்.
3. கெட்டியை பத்து முறை கவிழ்த்து உள்ளே உள்ள கரைந்த வினைகளை நன்கு கலக்கவும்.
4. காற்று குமிழ்களை அகற்ற பெஞ்சில் மெதுவாக கெட்டியைத் தட்டவும். கெட்டியை அறை வெப்பநிலையில் சேமிக்கவும், அது 4 மணி நேரத்திற்குள் பயன்படுத்தப்படும்.

ஓட்டம் செல் தயார்

பெஞ்ச் தயார்

• 1x NextSeq™ 500/550 High Output Flow Cell v2.5.

வழிமுறைகள்

1.  குளிரூட்டப்பட்ட ஓட்டக் கலத்தை 30 நிமிடங்களுக்கு அறை வெப்பநிலையில் கொண்டு வரவும்.
2.  புதிய தூள் இல்லாத கையுறைகளை அணியுங்கள் (ஓட்டம் கலத்தின் கண்ணாடி மேற்பரப்பை மாசுபடுத்துவதைத் தவிர்க்க).
3.  கருவியில் ஓட்டக் கலத்தை ஏற்றுவதற்குத் தயாரானதும், பேக்கேஜ் மற்றும் பிளாஸ்டிக் கிளாம்ஷெல்லிலிருந்து ஃப்ளோ கலத்தை அகற்றவும்.
4.  ஓட்ட கலத்தை ஆய்வு செய்யுங்கள். கண்ணாடிப் பரப்பில் ஏதேனும் துகள்கள் அல்லது தூசி தெரிந்தால், பஞ்சு இல்லாத ஐசோபிரைல் ஆல்கஹால் துடைப்பம் மூலம் பொருந்தக்கூடிய மேற்பரப்பை சுத்தம் செய்து, குறைந்த பஞ்சு கொண்ட ஆய்வக திசுக்களைக் கொண்டு உலர்த்தவும்.

வரிசைப்படுத்துவதற்கு Olink® நூலகத்தைத் தயாரிக்கவும்

இந்த படிநிலையின் போது, ​​NaOH மற்றும் Tris-HCl நீர்த்தங்கள் தயாரிக்கப்படுகின்றன, மேலும் சுத்திகரிக்கப்பட்ட மற்றும் தரம் கட்டுப்படுத்தப்பட்ட ஒலிங்க் லைப்ரரி வரிசையான படிகளில் நீர்த்துப்போக மற்றும் நீக்கப்பட்டது.

NaOH நீர்த்தலை தயார் செய்யவும்
NaOH நீர்த்தம் நூலகங்களை குறைப்பதற்கு பயன்படுத்தப்படுகிறது.

பெஞ்ச் தயார்

• 1 N NaOH பங்கு
• MilliQ தண்ணீர்
• 1x மைக்ரோசென்ட்ரிஃப்யூஜ் குழாய் (1.5 மிலி)
• கையேடு குழாய் (10-100 μL)
• வடிகட்டி பைப்பெட் குறிப்புகள்

நீங்கள் தொடங்குவதற்கு முன்
மைக்ரோசென்ட்ரிஃப்யூஜ் குழாயை "NaOH" எனக் குறிக்கவும்.

வழிமுறைகள்

1. அட்டவணை 0.2 இன் படி NaOH குழாயில் 2 N NaOH நீர்த்தலைத் தயாரிக்கவும்.
2. NaOH குழாயை முழுமையாக சுழற்றி கீழே சுழற்றவும். 12 மணி நேரத்திற்குள் பயன்படுத்தவும்.

அட்டவணை 2. 0.2 N NaOH நீர்த்தல்

வினைப்பொருள்	தொகுதி (μL)
MilliQ தண்ணீர்	80
1 N NaOH பங்கு	20

2.4.2 Tris-HCl நீர்த்தலைத் தயாரிக்கவும்
டினாச்சுரேட்டட் லைப்ரரியை நடுநிலையாக்க Tris-HCl நீர்த்தல் பயன்படுத்தப்படுகிறது.

பெஞ்ச் தயார்

• 1 M Tris-HCl pH 7.0 பங்கு (Trizma® ஹைட்ரோகுளோரைடு கரைசல்)
• MilliQ தண்ணீர்
• 1x மைக்ரோசென்ட்ரிஃப்யூஜ் குழாய் (1.5 மிலி)
• கையேடு குழாய் (10-100 μL)
• வடிகட்டி பைப்பெட் குறிப்புகள்

நீங்கள் தொடங்குவதற்கு முன்

• மைக்ரோசென்ட்ரிஃப்யூஜ் குழாயை "Tris-HCl" எனக் குறிக்கவும்

வழிமுறைகள்

1. அட்டவணை 200 இன் படி Tris-HCl குழாயில் 3 mM Tris-HCl நீர்த்தலைத் தயாரிக்கவும்.
2. டிரிஸ்-எச்.சி.எல் குழாயை முழுமையாக சுழற்றி கீழே சுழற்றவும்.

அட்டவணை 3. 200 mM Tris-HCl நீர்த்தல்:

வினைப்பொருள்	தொகுதி (μL)
MilliQ தண்ணீர்	80
1M Tris-HCl pH 7.0 பங்கு (Trizma® ஹைட்ரோகுளோரைடு தீர்வு)	20

Olink® நூலகங்களை நீர்த்துப்போகச் செய்யுங்கள்
இந்த படிநிலையின் போது, ​​சுத்திகரிக்கப்பட்ட மற்றும் தரம் கட்டுப்படுத்தப்பட்ட ஒலிங்க் லைப்ரரி 1:33 நீர்த்தப்படுகிறது.

பெஞ்ச் தயார்

• Lib Tube, பொருந்தும் Olink Explore User Manual இன் படி தயாரிக்கப்பட்டது
• MilliQ தண்ணீர்
• 1x மைக்ரோசென்ட்ரிஃப்யூஜ் குழாய் (1.5 மிலி)
• கைமுறை பைப்பெட்டுகள் (0.5-10 மற்றும் 100-1000 μL)
• வடிகட்டி பைப்பெட் குறிப்புகள்

நீங்கள் தொடங்குவதற்கு முன்

• லிப் ட்யூப் உறைந்திருந்தால் கரைக்கவும்.
• புதிய மைக்ரோ சென்ட்ரிஃப்யூஜ் குழாயைக் குறிக்கவும்: "தில்".

வழிமுறைகள்

1. தில் குழாயில் 96 μL MilliQ தண்ணீரைச் சேர்க்கவும்.
2. லிப் குழாயை சுழற்றி சுருக்கமாக சுழற்றவும்.
3. லிப் ட்யூப்பில் இருந்து தில் ட்யூப்பிற்கு 3 μL ஐ மாற்றவும்.
4. தில் குழாயை சுழற்றி சுருக்கமாக சுழற்றவும்

Olink® நூலகத்தை இறுதி ஏற்றுதல் செறிவுக்கு மாற்றவும் மற்றும் நீர்த்துப்போகவும்
இந்த படிநிலையின் போது, ​​நீர்த்த ஒலிங்க் லைப்ரரி குறைக்கப்பட்டு, இறுதி ஏற்றுதல் செறிவுக்கு மேலும் நீர்த்தப்படுகிறது.

பெஞ்ச் தயார்

• தில் டியூப், முந்தைய படியில் தயாரிக்கப்பட்டது
• 0.2 N NaOH நீர்த்தம், முந்தைய படியில் புதிதாக தயாரிக்கப்பட்டது
• 200 mM Tris-HCl (pH 7.0) நீர்த்தல், முந்தைய படியில் தயாரிக்கப்பட்டது
• ஹைப்ரிடைசேஷன் பஃபர் 1 (HT1) NextSeq™ துணைப் பெட்டி v2 இல் சேர்க்கப்பட்டுள்ளது
• 2x மைக்ரோசென்ட்ரிஃப்யூஜ் குழாய்கள் (1.5 மிலி மற்றும் 2 மிலி)
• கைமுறை பைப்பெட்டுகள் (0.5-10 மற்றும் 100-1000 μL)
• வடிகட்டி பைப்பெட் குறிப்புகள்

நீங்கள் தொடங்குவதற்கு முன்

• உறைந்த HT1 இடையகத்தை அறை வெப்பநிலையில் கரைக்கவும். பயன்படுத்தும் வரை +4 °C இல் சேமிக்கவும்.
• புதிய 1.5 மில்லி மைக்ரோசென்ட்ரிஃப்யூஜ் குழாயைக் குறிக்கவும்: "டென்" (இழிவுபடுத்தப்பட்ட நூலகத்திற்கு).
• புதிய 2 mL மைக்ரோசென்ட்ரிஃப்யூஜ் குழாயைக் குறிக்கவும்: "Seq" (நூலகத்தை ஏற்றுவதற்குத் தயாராக உள்ளது).

வழிமுறைகள்

1. 5 μL ஐ தில் குழாயிலிருந்து டென் ட்யூப்பிற்கு மாற்றவும்.
2. டென் டியூப்பில் 5 μL 0.2 N NaOH ஐச் சேர்க்கவும்.
3. டென் குழாயை சுழற்றி சுருக்கமாக சுழற்றவும்.
4. லைப்ரரியை சிதைக்க அறை வெப்பநிலையில் 5 நிமிடங்களுக்கு டென் குழாயை அடைகாக்கவும்.
5. எதிர்வினையை நடுநிலையாக்க டென் குழாயில் 5 μL 200 mM Tris-HCl (pH 7.0) சேர்க்கவும்.
6. டென் குழாயை சுழற்றி சுருக்கமாக சுழற்றவும்.
7. 985 μL prechilled HT1ஐ டென் ட்யூப்பில் சேர்க்கவும்.
8. டென் குழாயை சுழற்றி சுருக்கமாக சுழற்றவும். குழாயை பயன்படுத்தும் வரை (அதே நாளில்) +4 °C இல் சேமிக்கலாம்.
9. 205 μL ஐ டென் ட்யூப்பில் இருந்து Seq குழாய்க்கு மாற்றவும்.
10. Seq குழாய்க்கு 1095 μL prechilled HT1 ஐ சேர்க்கவும்.
11. செக் குழாயைத் தலைகீழாக மாற்றி, எதிர்வினைகளை கலக்கவும், அதை சுருக்கமாக சுழற்றவும். இறுதி ஏற்றுதல் அளவு 1.3 மிலி.
12. உடனடியாக 2.5 Olink® வரிசைப்படுத்தல் ரன் தொடரவும்.

Olink® சீக்வென்சிங் ரன் செய்யவும்

இந்த படிநிலையின் போது, ​​இடையக கார்ட்ரிட்ஜ், ஃப்ளோ செல் மற்றும் ஒலிங்க் லைப்ரரியைக் கொண்ட தயாரிக்கப்பட்ட ரீஜென்ட் கார்ட்ரிட்ஜ் ஆகியவை NextSeq 550 இல் ஏற்றப்படுகின்றன, மேலும் ஒலிங்க் தனிப்பயன் செய்முறையைப் பயன்படுத்தி வரிசைப்படுத்தல் ரன் தொடங்கப்படுகிறது.

பெஞ்ச் தயார்

• Seq Tube (நூலகத்தை ஏற்றுவதற்கு தயாராக உள்ளது), முந்தைய படியில் தயாரிக்கப்பட்டது
• 1x NextSeq™ 500/550 High Output Reagent Cartridge v2, முந்தைய படியில் தயாரிக்கப்பட்டது
• 1x NextSeq™ 500/550 High Output Flow Cell v2.5, முந்தைய படியில் தயாரிக்கப்பட்டது
• 1x NextSeq™ 500/550 Buffer Cartridge v2 (75 சுழற்சிகள்), அறை வெப்பநிலையில்

வரிசைப்படுத்தும் ரன் அளவுருக்களை அமைக்கவும்
இந்த படிநிலையின் போது, ​​வரிசைப்படுத்தும் ரன் அளவுருக்கள் NextSeq™ 550 இல் தேர்ந்தெடுக்கப்படும்.

1. NextSeq™ 550 முகப்புத் திரையில், பரிசோதனையைத் தேர்ந்தெடுக்கவும்.
2. தேர்வு மதிப்பீடு திரையில், வரிசையைத் தேர்ந்தெடுக்கவும்.
3. ரன் அமைவு பக்கத்தில், கைமுறையாக இயங்கும் பயன்முறையைத் தேர்ந்தெடுத்து அடுத்து என்பதைத் தேர்ந்தெடுக்கவும்.
4. ரன் அளவுருக்களை பின்வருமாறு அமைக்கவும்:
   • இயக்கு பெயர் புலத்தில், தனிப்பட்ட பரிசோதனை ஐடியை உள்ளிடவும்.
   • நூலக ஐடி புலத்தில், நீங்கள் இயங்கும் நூலகத்தின் ஐடியை உள்ளிடவும் (விரும்பினால்).
   • வாசிப்பு வகை புலத்தில், ஒற்றை வாசிப்பு விருப்பத்தைத் தேர்ந்தெடுக்கவும்.
   • சுழற்சிகளின் எண்ணிக்கையை பின்வருமாறு உள்ளிடவும்:
     • 1:24ஐப் படியுங்கள்
     • குறியீட்டு 1: 0
     • குறியீட்டு 2: 0
     • 2:0ஐப் படியுங்கள்
   • தனிப்பயன் ப்ரைமர்களுக்கான தேர்வுப்பெட்டியைத் தேர்ந்தெடுக்காமல் வைத்திருங்கள்.
   • தற்போதைய ரன் ரா தரவுக்கான வெளியீட்டு கோப்புறை இருப்பிடத்தை அமைக்கவும். வெளியீட்டு கோப்புறை இருப்பிடத்தை மாற்ற உலாவு என்பதைத் தேர்ந்தெடுக்கவும்.
5. எஸ் அமைக்க வேண்டாம்ample தாள்.
6. இந்த ஓட்டத்திற்கு பர்ஜ் நுகர்பொருட்களைத் தேர்ந்தெடுக்கவும்.
7. அடுத்து என்பதைத் தேர்ந்தெடுக்கவும்.

NextSeq™ 550 இல் ஃப்ளோ கலத்தை ஏற்றவும்

1. முந்தைய இயக்கத்திலிருந்து பயன்படுத்தப்பட்ட ஃப்ளோ கலத்தை அகற்றவும்.
2. புதிய தயாரிக்கப்பட்ட ஓட்டக் கலத்தை s இல் வைக்கவும்tage.
3. ஏற்றுவதைத் தேர்ந்தெடுக்கவும். கதவு தானாக மூடப்படும்.
4. ஃப்ளோ செல் ஐடி திரையில் தோன்றி, சென்சார்கள் பச்சை நிறத்தில் சரிபார்க்கப்பட்டால், அடுத்து என்பதைத் தேர்ந்தெடுக்கவும்

மறுஉருவாக்கம் கொள்கலனை காலி செய்யவும்
எச்சரிக்கை: இந்த வினைப்பொருள்களின் தொகுப்பில் அபாயகரமான இரசாயனங்கள் உள்ளன. போதுமான பாதுகாப்பு உபகரணங்களை அணியுங்கள் மற்றும் பொருந்தக்கூடிய தரநிலைகளின்படி பயன்படுத்தப்பட்ட வினைகளை நிராகரிக்கவும். மேலும் தகவலுக்கு, Illumina NextSeq 550 கணினி வழிகாட்டியைப் பார்க்கவும்.

1. இடையகப் பெட்டியின் கதவைத் திறந்து, கீழ்ப் பெட்டியிலிருந்து செலவழிக்கப்பட்ட ரியாஜென்ட் கொள்கலனை அகற்றி, பொருந்தக்கூடிய தரநிலைகளின்படி உள்ளடக்கத்தை அப்புறப்படுத்தவும்.
2. வெற்று ரீஜென்ட் கொள்கலனை மீண்டும் கீழ் இடையகப் பெட்டியில் ஸ்லைடு செய்யவும். கேட்கக்கூடிய கிளிக், கொள்கலன் சரியாக வைக்கப்பட்டுள்ளதைக் குறிக்கிறது.

சுமை தாங்கல் பொதியுறை

1. மேல் இடையகப் பெட்டியிலிருந்து பயன்படுத்தப்பட்ட பஃபர் கார்ட்ரிட்ஜை அகற்றி, பொருந்தக்கூடிய தரநிலைகளுக்கு ஏற்ப உள்ளடக்கத்தை அப்புறப்படுத்தவும்.
2. மேல் இடையகப் பெட்டியில் புதிய பஃபர் கார்ட்ரிட்ஜை ஸ்லைடு செய்யவும். கேட்கக்கூடிய கிளிக் கார்ட்ரிட்ஜ் சரியாக வைக்கப்பட்டுள்ளதைக் குறிக்கிறது. பஃபர் கார்ட்ரிட்ஜ் ஐடி திரையில் தோன்றுவதையும் சென்சார்கள் பச்சை நிறத்தில் சரிபார்க்கப்பட்டதையும் உறுதிசெய்யவும்.
3. இடையகப் பெட்டியின் கதவை மூடிவிட்டு அடுத்து என்பதைத் தேர்ந்தெடுக்கவும்.

ரியாஜென்ட் கார்ட்ரிட்ஜை ஏற்றவும்

1. மறுஉருவாக்கம் பெட்டியின் கதவைத் திறந்து, பயன்படுத்தப்பட்ட ரியாஜென்ட் கார்ட்ரிட்ஜை அகற்றி, பொருந்தாத தரநிலைகளின்படி பயன்படுத்தப்படாத உள்ளடக்கத்தை அப்புறப்படுத்தவும். 6வது இடத்தில் உள்ள நீர்த்தேக்கம் பாதுகாப்பாக அகற்றுவதற்கு வசதியாக நீக்கக்கூடியது.
2. "இங்கே லோட் லைப்ரரி" என லேபிளிடப்பட்ட நீர்த்தேக்கத்தின் #10 முத்திரையை சுத்தமான 1 மில்லி பைப்பெட் முனையுடன் துளைக்கவும்.
3. 1.3 மில்லி ஒலிங்க் லைப்ரரியை Seq ட்யூப்பில் இருந்து "இங்கே லைப்ரரியை ஏற்று" என லேபிளிடப்பட்ட #10 நீர்த்தேக்கத்தில் ஏற்றவும்.
4. புதிய ரியாஜென்ட் கார்ட்ரிட்ஜை ரியாஜென்ட் பெட்டியில் ஸ்லைடு செய்து, ரியாஜென்ட் பெட்டியின் கதவை மூடவும்.
5. லோட் என்பதைத் தேர்ந்தெடுத்து, ரியாஜென்ட் கார்ட்ரிட்ஜ் ஐடி திரையில் தோன்றும் வரை ~30 வினாடிகள் காத்திருக்கவும் மற்றும் சென்சார்கள் பச்சை நிறத்தில் சரிபார்க்கப்படும்.
6. செய்முறை கீழ்தோன்றும் பட்டியலில் இருந்து, [Custom] “Olink_NSQ550_HighOutput_V1” செய்முறை விருப்பத்தைத் தேர்ந்தெடுக்கவும்.
7. அடுத்து என்பதைத் தேர்ந்தெடுக்கவும்.

வரிசைப்படுத்தல் ரன் தொடங்கவும்

1. Re இல் காட்டப்படும் ரன் அளவுருக்களை உறுதிப்படுத்தவும்view திரை. எந்த அளவுருக்களையும் திருத்த, ரன் அமைவுத் திரைக்குத் திரும்ப Back என்பதை அழுத்தவும்.
2. அடுத்து என்பதைத் தேர்ந்தெடுக்கவும். தானியங்கி முன்-இயக்கச் சரிபார்ப்புக்குப் பிறகு ரன் தொடங்குகிறது. வரிசைமுறை இயக்க நேரம் தோராயமாக 7h30 நிமிடம்.
3. வேலை செய்யும் பகுதியை சுத்தம் செய்யவும்.

குறிப்பு: சீக்வென்சிங் ரன் முடிந்ததும், மென்பொருளானது பஃபர் கார்ட்ரிட்ஜில் வழங்கப்பட்ட வாஷ் தீர்வுகள் மற்றும் ரியாஜென்ட் கார்ட்ரிட்ஜில் வழங்கப்பட்ட NaOCl ஆகியவற்றைப் பயன்படுத்தி தானியங்கி பிந்தைய ரன் கழுவலைத் தொடங்குகிறது. இந்த கழுவுதல் சுமார் 90 நிமிடங்கள் எடுக்கும். கழுவுதல் முடிந்ததும் முகப்பு பொத்தான் செயலில் இருக்கும். பயன்படுத்திய கார்ட்ரிட்ஜ்கள் மற்றும் ஃப்ளோ செல் அடுத்த ரன் வரை இடத்தில் விடப்படும்.

ரன் முன்னேற்றத்தை கண்காணிக்கவும்
s இல் கொடுக்கப்பட்ட புரதத்தின் செறிவை மதிப்பிடுவதற்காக அறியப்பட்ட வரிசையின் அளவைக் கணக்கிடுவதற்கு ஒலிங்க் NGS ஐ ரீட்அவுட்டாகப் பயன்படுத்துகிறது.ampலெஸ் (மற்றவற்றுடன் தொடர்புடையதுamples). ஒவ்வொரு எக்ஸ்ப்ளோர் சீக்வென்சிங் ரன்களிலிருந்தும் தரவின் தரம் முக்கியமாக ஒலிங்க் தொழில்நுட்பத்திற்கு தனித்துவமான QC அளவுருக்களால் தீர்மானிக்கப்படுகிறது. எனவே, Q-ஸ்கோர் போன்ற வழக்கமான NGS இல் பயன்படுத்தப்படும் நிலையான தரக் கட்டுப்பாட்டு அளவீடுகள் குறைவான முக்கியமானவை.

சரிபார்ப்பு வரலாறு

பதிப்பு	தேதி	விளக்கம்
1.1	2021-12-13	தலையங்க மாற்றங்கள்
1.0	2021-12-01	புதியது

www.olink.com
ஆராய்ச்சி பயன்பாட்டிற்கு மட்டுமே. நோயறிதல் நடைமுறைகளில் பயன்படுத்துவதற்கு அல்ல.
இந்த தயாரிப்பில் Olink தயாரிப்புகளின் வணிகரீதியான பயன்பாட்டிற்கான உரிமம் உள்ளது. வணிகப் பயனர்களுக்கு கூடுதல் உரிமங்கள் தேவைப்படலாம். Olink ஐ தொடர்பு கொள்ளவும்
விவரங்களுக்கு Proteomics AB. இந்த விளக்கத்திற்கு அப்பால் நீட்டிக்கப்பட்ட எந்த உத்தரவாதங்களும் வெளிப்படுத்தப்படவில்லை அல்லது மறைமுகமாக இல்லை. இந்த தயாரிப்பால் ஏற்படும் சொத்து சேதம், தனிப்பட்ட காயம் அல்லது பொருளாதார இழப்பு ஆகியவற்றிற்கு Olink Proteomics AB பொறுப்பேற்காது.
பின்வரும் வர்த்தக முத்திரை Olink Proteomics AB க்கு சொந்தமானது: Olink®.
இந்த தயாரிப்பு பல காப்புரிமைகள் மற்றும் காப்புரிமை பயன்பாடுகள் மூலம் மூடப்பட்டிருக்கும் https://www.olink.com/patents/.
© பதிப்புரிமை 2021 Olink Proteomics AB. அனைத்து மூன்றாம் தரப்பு வர்த்தக முத்திரைகளும் அந்தந்த உரிமையாளர்களின் சொத்து. ஒலிங்க் புரோட்டியோமிக்ஸ், டாக் ஹம்மர்ஸ்க்ஜோல்ட்ஸ் väg 52B , SE-752 37 உப்சாலா, ஸ்வீடன்
1192, v1.1, 2021-12-13

ஆவணங்கள் / ஆதாரங்கள்

NextSeq 550 ஐப் பயன்படுத்தி Olink வரிசைமுறையை ஆராயுங்கள் [pdf] பயனர் கையேடு NextSeq 550, NextSeq 550 ஐப் பயன்படுத்தி, வரிசைமுறையை ஆராயுங்கள்.

குறிப்புகள்

• பயனர் கையேடு