Testovací sada Olink Target 48

Krátké pokyny

Inkubace

Připravte inkubační směs v mikrocentrifugační zkumavce podle níže uvedené tabulky.

Inkubační směs na ½ 96jamkové destičky (μl)

• Inkubační roztok Olink® 1-48 plex 168
• Olink® Target 48 Frw-sondy 21
• Olink® Target 48 Rev-sondy 21
• Celkem 210

1. Vortexujte a odstřeďte inkubační směs. Přeneste 23 μl inkubační směsi do každé jamky nového 8jamkového stripu.
2. Přeneste 3 μl inkubační směsi do každé jamky prvních 6 sloupců 96jamkové destičky reverzním pipetováním a pojmenujte destičku Inkubační destička.
3. Přidejte 1 μl každé sample pomocí vícekanálové pipety na dno jamky, 1 μl Sample Kontrola do tří horních jamek (žlutá), 1 μl negativní kontroly do dvou jamek (červená) a 1 μl kalibrátorů do tří jamek (zelená) podle uspořádání destičky.
4. Destičku uzavřete lepicí plastovou fólií, odstřeďte při 400 – 1000 xg, 1 min při pokojové teplotě. Inkubujte přes noc při +4 °C.
5. Roztok PEA rozmrazte přes noc při +4 °C a umístěte přípravek PEA Enhancer přes noc při pokojové teplotě.

Rozšíření

Připravte prodlužovací směs podle níže uvedené tabulky.

Prodlužovací směs na ½ 96jamkové destičky (μl)

• Voda s vysokou čistotou (+4 °C) 4350
• Olink® 1-48 plex PEA Enhancer 580
• Olink® 1-48 plex PEA Solution 580
• Olink® 1-48 plex PEA enzym 58
• Celkem 5 568

1. Inkubační destičku vytemperujte na pokojovou teplotu, otáčejte při 400 – 1000 xg po dobu 1 minuty. Předehřejte stroj PCR.
2. Vortexujte směs Extension a nalijte ji do vícekanálového zásobníku pipety.
3. Spusťte časovač na 5 minut a přeneste 96 μl prodlužovací směsi do horních částí stěn jamek inkubační destičky pomocí reverzního pipetování.
4. Uzavřete destičku novou lepicí plastovou fólií, použijte MixMate® k vortexování destičky při 2000 otáčkách za minutu po dobu 30 sekund, přičemž se ujistěte, že jsou všechny jamky promíchány, a odstřeďte.
5. Umístěte inkubační destičku do termocykléru a spusťte program PEA. (50 °C 20 min, 95 °C 5 min (95 °C 30 s, 54 °C 1 min, 60 °C 1 min) x 17, 10 °C výdrž)

Detekce

1. Připravte a naplňte Olink® 48.48 IFC pro proteinovou expresi. Krátce vstříkněte jednu injekční stříkačku s kontrolní hadičkou do každého akumulátoru na čipu, odstraňte ochrannou fólii ze spodní části IFC a poté naplňte IFC na Olink® Signature Q100 podle pokynů na obrazovce přístroje.
2. Rozmrazte základní desku, vortexujte a krátce otočte.
3. Připravte si Detekční směs podle níže uvedené tabulky.
   Detekční směs na ½ 96jamkové destičky (μL)
   1. Olink® 1-48 plex Detection Solution 275.0
   2. Voda s vysokou čistotou 116.0
   3. Olink® 1-48 plex detekční enzym 3.9
   4. Olink® 1-48 plex PCR polymeráza 1.5
   5. Celkem 396.4
4. Detekční směs promíchejte na vortexu a krátce odstřeďte a přidejte 46 μl směsi do každé jamky 8jamkového stripu.
5. Přeneste 7.2 μl detekční směsi do každé jamky sloupce 1-6 v nové 96jamkové destičce reverzním pipetováním a pojmenujte ji Sample Plate.
6. Vyjměte inkubační destičku z termocykleru, odstřeďte obsah a přeneste 2.8 μl do Sample Plate pomocí pipetování dopředu.
7. Destičku uzavřete lepicí fólií, vortexujte a obě otočte při 400 – 1000 xg, 1 min při pokojové teplotě.
8. Přeneste 5 μl z každé jamky sloupce 1-6 destičky Primer Plate a 5 μl z každé jamky sloupce 1-6 destičky Sample Deska do napuštěného levého a pravého vstupu 48.48 IFC. Použijte reverzní pipetování a vyměňte špičky po každém primeru nebo sample. Nenechávejte žádné vstupy prázdné.
9. Odstraňte bubliny a vložte IFC do Olink Signature Q100 a postupujte podle pokynů na obrazovce přístroje.
10. Spusťte IFC na Olink Signature Q100.

www.olink.com
© 2023 Olink Proteomics AB. Produkty a služby Olink jsou určeny pouze pro výzkumné účely, nikoli pro použití v diagnostických postupech. Všechny informace v tomto dokumentu se mohou bez upozornění změnit. Tento dokument nemá za cíl poskytovat žádné záruky, prohlášení a/nebo doporučení jakéhokoli druhu, pokud takové záruky, prohlášení a/nebo doporučení nejsou výslovně uvedeny. Olink nepřebírá žádnou odpovědnost vyplývající z jednání potenciálního čtenáře na základě tohoto dokumentu. OLINK a logotyp Olink jsou ochranné známky registrované nebo čekající na registraci společností Olink Proteomics AB. Všechny ochranné známky třetích stran jsou majetkem příslušných vlastníků. Produkty Olink a testovací metody jsou pokryty několika patenty a patentovými přihláškami https://www.olink.com/patents/. Olink Proteomics, Dag Hammarskjölds väg 52B , SE-752 37 Uppsala, Švédsko 1126, v1.3, 2023-01-18

Dokumenty / zdroje

Testovací sada Olink Target 48 [pdfPokyny Target 48, testovací sada, Target 48 testovací sada

Reference

• Uživatelská příručka