ìmúdàgba BIOSENSORS heliX cyto Ni kikun aládàáṣiṣẹ yàrá Analysis System olumulo Afowoyi

Eto cyto heliX jẹ apẹrẹ fun Cytometry Ibaṣepọ sẹẹli-ẹyọkan (scIC) lati wiwọn awọn kinetics abuda ti awọn ohun elo ti a fi aami si fluorescently si awọn ibi-afẹde lori awọn oju sẹẹli ni ọna ipinnu akoko.

Awọn ilana Lilo ọja

Lilo heliXcyto Chip

Chirún heliXcyto ni ikanni microfluidic kan ṣoṣo pẹlu awọn aaye elekiturodu fun gbigba sẹẹli ati wiwọn. Rii daju pe o yẹ ibi ti ërún ati tẹle awọn ilana fun idẹkùn awọn sẹẹli.

Chip itọju

Lo Chip Itọju fun mimọ, idanwo, ati awọn iṣẹ itọju nikan. Yẹra fun lilo rẹ fun awọn idanwo lati ṣe idiwọ ibajẹ.

Nṣiṣẹ Buffer

Lo Buffer Nṣiṣẹ 1 (RB 1) lakoko awọn wiwọn. Tọkasi iwe ibamu scIC ninu itọsọna akọkọ fun alaye alaye.

Sensorgram Analysis

Ṣe abojuto sensọgram ni akoko gidi ni sọfitiwia heliOS lakoko awọn wiwọn. Ṣe itupalẹ esi Fuluorisenti lori akoko lati jade awọn oṣuwọn kainetik.

Passivation

Gbero lilo passivation bi igbesẹ iyan lati ṣe idiwọ adsorption analyte nipa fifalẹ reagent passivation kan lori chirún naa.

Iṣe deede

Iṣe deede jẹ ilana lati ṣe iwọn data fun lafiwe ati itupalẹ. Tẹle awọn ilana isọdi deede gẹgẹbi fun itọnisọna olumulo.

AKOSO

Itọsọna yii jẹ itumọ bi kukuru kukuruview ti eto heliXcyto ati awọn agbara rẹ. Gbogbo awọn ipin ti wa ni gbooro lori ni akọkọ heliXcyto guide ri ni https://www.dynamic-biosensors.com/helios-download-latest/

heliXcyto Terminology nikan-cell Interaction Cytometry

Cytometry Ibaraẹnisọrọ ọkan-ẹyọkan (scIC) jẹ imọ-ẹrọ ti o ṣe iwọn awọn kinetics abuda ti molikula ti o ni aami fluorescently (analyte) si ibi-afẹde kan (ligand) lori oju sẹẹli nipasẹ gbigbasilẹ ifihan agbara fluorescent ni akoko ipinnu.

Atupalẹ

Analyte jẹ moleku ti o ni aami fluorescently ni ipele alagbeka kan ti o le so mọ ibi-afẹde kan lori oju sẹẹli kan.

Ligand

Ligand” ni orukọ ti a lo ninu sọfitiwia heliOS lati ṣe apejuwe ibi-afẹde kan lori oju sẹẹli eyiti analyte le sopọ mọ eyi le jẹ moleku olugba, ọra, suga tabi moleku oju sẹẹli miiran.

Pakute Cell

Awọn ẹgẹ sẹẹli jẹ sisan-permeable, awọn cages polima biocompatible lori chirún heliXcyto kan. Wọn ṣe apẹrẹ lati yaworan ati ṣe aibikita awọn sẹẹli ti o yatọ lati bii 6 si 25 µm ni ikanni ṣiṣan. Awọn ẹgẹ sẹẹli wa ni awọn titobi oriṣiriṣi 3: kekere, alabọde ati nla.

heliXcyto Chip

Awọn eerun heliXcyto ni ikanni microfluidic kan pẹlu awọn ṣiṣi ni ẹgbẹ kọọkan. Awọn aaye elekiturodu goolu meji wa ni aarin ikanni naa.

Aami kan n ṣiṣẹ bi aaye itọkasi, ati aaye keji gbe awọn cages polymer biocompatible 3D fun gbigba sẹẹli ati ṣiṣẹ bi aaye wiwọn. Aami wiwọn le ni awọn ẹgẹ 1 tabi 5 ti iru kanna.
Aami itọka naa ngbanilaaye itọkasi akoko gidi ti ifihan agbara Fuluorisenti ti a gba. Chirún heliXcyto jẹ atunlo ati isọnu.

Chip itọju

Chip Itọju jẹ chirún microfluidic ikanni kan ti a lo fun gbogbo mimọ, idanwo ati awọn iṣẹ itọju.
Awọn iṣẹ wọnyi pẹlu mimọ & ilana isunmọ oorun, Ji dide ati ilana iṣe Prime, fifọ eto ati idanwo Fluidics. Yi ni ërún ko yẹ ki o ṣee lo fun gangan adanwo pẹlu cell/amuaradagba solusan lati se siwaju kontaminesonu ti awọn ërún.

Nṣiṣẹ Buffer

Nṣiṣẹ ifipamọ jẹ ifipamọ ti a lo ninu heliXcyto lakoko wiwọn. Lilo Buffer Nṣiṣẹ 1 (RB 1) ni a gbaniyanju ni gbogbogbo.
Jọwọ tọka si iwe ibamu scIC ti a rii ninu itọsọna akọkọ fun alaye diẹ sii.

Sensorgram

SIC sensọgram jẹ igbero ti idahun fluorescence ni awọn iṣiro fun iṣẹju kan (cps) ju akoko lọ, ti n ṣe afihan ilọsiwaju ti ibaraenisepo lori tabi ninu awọn sẹẹli. Yi ti tẹ le jẹ viewed ni akoko gidi ni heliOS lakoko wiwọn.
Nigbati o ba n ṣe itupalẹ awọn sensọgram, imudara ibamu ti o dara julọ si awọn itọpa Fuluorisenti ti a ṣe akiyesi ni ipinnu ati awọn oṣuwọn kainetik (kon, koff) fa jade.

Passivation

Passivation jẹ igbesẹ iyan ni ṣiṣe, nibiti a ti fi itasi reagent passivation sori chirún ati ti a fi sii lati dènà awọn aaye. Eyi le ṣe iranlọwọ idilọwọ adsorption ti awọn atunnkanka si awọn ohun elo ërún.

Iṣe deede

Igbesẹ deede jẹ iṣẹ lati ṣe akọọlẹ fun awọn iyatọ diẹ ninu awọn ifihan agbara nitori gbigba ifihan agbara lati aaye wiwọn kọọkan nipasẹ aṣawari lọtọ. Dye Fuluorisenti ti ifọkansi asọye (ti o da lori ifọkansi atupale ti o ga julọ ati alefa ti isamisi analyte) ni itasi ni ibẹrẹ ayẹwo. Igbese isọdọtun yii wa ni adaṣe laifọwọyi ninu ọna wiwọn, ati pe tente oke isọdọtun ni a lo lati ṣe atunṣe laifọwọyi fun awọn iyatọ laarin awọn aṣawari lakoko itupalẹ data, ṣaaju itọkasi akoko gidi.

Awọn Ilana wiwọn scIC

Awọn ohun elo scIC

Cytometry Ibaṣepọ sẹẹli-ẹyọkan (scIC) ṣe iwọn awọn oṣuwọn kainetik ati isunmọ ti isọdọmọ itupale fluorescently si ati yọkuro lati ibi-afẹde rẹ taara lori awọn sẹẹli alãye.
Wiwa ti awọn atupale ni scIC jẹ iwọn-ominira ati nitorina o ṣe pataki si eyikeyi moleku lati sub-nm si> 100 nm ati ti o baamu si gbogbo awọn kilasi moleku lati awọn ohun elo kekere, peptides, aptamers, nanobodies, affibodies, antibodies, bispecific antibody formats, proteins, proteins, proteins, nanoparticles, ati awọn virus.

Imọ-ẹrọ scIC le koju awọn agbegbe ohun elo wọnyi:

wiwọn ifihan agbara amplitudes ni abuda iboju
kainetik igbekale ti kon ati koff awọn ošuwọn
ijora ati avidity igbelewọn nipasẹ koff ati biphasic fit si dede
pato igbeyewo
Iwọn ojulumo ti awọn ọlọjẹ awọ ara lori dada sẹẹli
epitope binning ati idije
idinamọ agbeyewo
igbelewọn ti abẹnu ti awọn ọlọjẹ ìfọkànsí

heliXcyto Hardware Awọn agbara

Eto ito

Eto omi ti heliXcyto jẹ ifunni nipasẹ awọn igo 3 oriṣiriṣi oriṣiriṣi, ti n mu awọn iyatọ ṣiṣẹ ati ifipamọ itọju. Awọn ifasoke ninu heliXcyto ni a le ṣeto si awọn iwọn sisan laarin 20 ati 500 µL/min, ṣiṣe ounjẹ si oriṣiriṣi sample ati assay ibeere. Awọn ikanni sisan ti ërún sopọ si awọn fluidic eto nipasẹ meji šiši. Ṣiṣii apa osi ti sopọ si sample, saarin, ati awọn laini fifọ, lakoko ti ṣiṣi apa ọtun ti sopọ mọ laini isọdọtun.

Eto olomi-ọna meji yii jẹ ki gbigba sẹẹli duro lakoko ṣiṣe awọn igbesẹ oriṣiriṣi ti wiwọn kan ati nikẹhin chirún isọdọtun fun ilotunlo chirún in-assay.
Olusin 1. Chip Integration ni Fluidic eto

Optical System

Awọn ifihan agbara fluorescence jẹ igbadun nipasẹ awọn diodes ti njade ina pupa ati alawọ ewe (Awọn LED) ati ti a rii nipasẹ awọn iṣiro fọto-ọkan mẹrin, eyiti o gba awọn ifihan agbara pupa ati awọ ewe lati aaye kọọkan jakejado ijinle kikun ti ikanni naa.

Awọn ifihan agbara olominira meji le ṣe abojuto nigbakanna lori aaye wiwọn kanna, gbigba awọn ibaraenisepo meji laaye lati ṣe iwọn ni ẹẹkan ni iṣeto ayẹwo awọ-meji.
Olusin 2. Optics setup
Gbigba ifihan agbara lati aaye wiwọn kọọkan jẹ itọju nipasẹ aṣawari lọtọ, eyiti o le ja si awọn iyatọ diẹ ninu awọn iṣiro aise. Lati ṣe akọọlẹ fun eyi, ipele isọdọtun kan wa ni adaṣe laifọwọyi ninu awọn igbelewọn ti n pese data.

Ni afikun si awọn iṣiro fọto ẹyọkan, ohun elo naa ni ipese pẹlu kamẹra CCD ati microscope ina ti o tan. Awọn irinṣẹ wọnyi ngbanilaaye fun aworan sẹẹli gidi-akoko, ti o mu ki iṣiro ti iduroṣinṣin sẹẹli ati didara itupalẹ jakejado wiwọn naa.
Iṣeto idapọpọ yii ṣe idaniloju mejeeji awọn ibaraenisepo ati awọn ipo ti ibi ti wa ni tọpinpin, n pese igbelewọn okeerẹ ti idanwo naa.

iṣan-iṣẹ scIC

Ilana wiwọn scIC le fọ si isalẹ si awọn igbesẹ bọtini 3

Apẹrẹ idanwo ni heliOS: Iwọn kọọkan bẹrẹ pẹlu ṣiṣe apẹrẹ idanwo ni sọfitiwia heliOS. Ṣiṣayẹwo ṣiṣiṣẹsẹhin ti ṣeto nipasẹ yiyan awọn ọna ti a ti pinnu tẹlẹ ati ṣatunṣe awọn aye idanwo, gẹgẹbi laini sẹẹli ti a lo, ifọkansi itupalẹ, ati awọn ipo ifipamọ. heliOS laifọwọyi ṣe iṣiro awọn iwọn kongẹ ti awọn sẹẹli, awọn itupalẹ, awọn buffers, ati awọn solusan miiran ti o ṣe pataki fun wiwọn, ṣiṣatunṣe ilana igbaradi.
Igbaradi ti awọn ifipamọ, awọn itupalẹ, ati awọn sẹẹli: Lẹhin apẹrẹ idanwo ti pari, awọn ohun elo ti a beere ni a pese sile ni ibamu si awọn pato ti a pese nipasẹ heliOS. Awọn ifipamọ, awọn atunnkanka, ati awọn sẹẹli ti wa ni ti kojọpọ sinu awọn adaṣe irinseampler.
Iwọn ati Iṣayẹwo Data: Eto naa ṣe lẹsẹsẹ eto ti awọn wiwọn ibaraenisepo akoko gidi adaṣe ti ko nilo idasi si siwaju sii lati ọdọ olumulo. Awọn data le ṣe itupalẹ lakoko ti wiwọn ṣi nṣiṣẹ lati gba awọn oye lẹsẹkẹsẹ sinu awọn abajade.

Awọn ayẹwo scIC ni heliOS

Ni afikun si awọn igbelewọn ti ipilẹṣẹ data, sọfitiwia naa tun pese awọn ọna fun idanwo chirún, mimọ ati itọju ohun elo.

Table 1. Wadi Data-ti o npese ayewo

SIC Kinetics	Awọn iwọn kinetics ni kikun lori awọn sẹẹli pẹlu ẹgbẹ analyte adijositabulu laarin awọn ifọkansi 1 ati 5, tẹle pẹlu ipinya kan lẹhin ifọkansi ti o ga julọ. Boya alawọ ewe tabi pupa ikanni. Ni aṣayan fun Idanwo Itupalẹ nikan.
SIC Kinetics - Meji Awọ	Awọn iwọn kinetics ni kikun lori awọn sẹẹli pẹlu ẹgbẹ analyte adijositabulu laarin awọn ifọkansi 1 ati 5, tẹle pẹlu ipinya kan lẹhin ifọkansi ti o ga julọ. Mejeeji alawọ ewe ati ikanni pupa ṣiṣẹ ni nigbakannaa. Ni aṣayan fun Idanwo Itupalẹ nikan.
SIC Dissociation - Meji Awọ	Ṣe iwọn iyapa ti analyte kan lati awọn sẹẹli ti a ti ṣaju-ṣaaju pẹlu itọka itọka ti fluorescently pẹlu alawọ ewe ati/tabi ikanni pupa.

Awọn igbaradi ati Idagbasoke Assay fun wiwọn scIC

Awọn aaye diẹ wa lati ronu ṣaaju ṣeto iwọn wiwọn scIC kan

Itupalẹ ifọkansi, Ipele ti Ifi aami, awọn ohun-ini, ati didara.
Ojutu Normalisation ati simi agbara.
Cell didara ati mimu.

Itupalẹ ifọkansi ati ìyí ti Labeling

Gẹgẹbi awọn iṣe wiwọn kainetik boṣewa, a ṣeduro yiyan iwọn ifọkansi molar analyte ti 0.1x si 10x ti a ti ṣe yẹ isọdiwọn isọdiwọn igbagbogbo (Kd) fun awọn kinetics ifọkansi pupọ. Fun awọn kinetics ifọkansi ẹyọkan tabi awọn wiwọn ipinya, ifọkansi analyte yẹ ki o wa laarin 1x ati 10x Kd ti a nireti. Iwọn itupale ti a beere ti ṣe iṣiro fun akoko ajọṣepọ iṣẹju 10 ni iwọn sisan ti 25 µL/min lapapọ ni isunmọ 300 µL.
Iwọn Ifamisi (DOL) fun itupalẹ yẹ ki o jẹ apere 1, botilẹjẹpe awọn iye DOL ti 2 tabi 3 tun jẹ itẹwọgba. Bibẹẹkọ, ṣe akiyesi pe nọmba ti o ga julọ ti awọn akole lori atunnkanka le ni ipa awọn ohun-ini abuda rẹ, ati pe o le pọsi iṣeeṣe ti iṣakojọpọ tabi isọdọkan pato. Lati ṣaṣeyọri DOL ti o dara julọ, tẹle ilana ti a pese pẹlu Awọn ohun elo Isamisi ti o ni awọ pupa tabi awọ alawọ ewe ninu laini reagents heliXcyto.
Iṣe deede
Iṣe deede jẹ igbesẹ akọkọ ni gbogbo awọn ọna ṣiṣe data. O sanpada fun awọn iyatọ ifihan agbara diẹ ti o ṣẹlẹ nipasẹ lilo awọn aṣawari lọtọ fun aaye wiwọn kọọkan. Ni igbesẹ yii, awọ Fuluorisenti kan ni ifọkansi asọye olumulo ti wa ni itasi ni ibẹrẹ idanwo naa.
Ifojusi ti Solusan Normalisation jẹ iṣiro nipasẹ isodipupo iwọn ifọkansi ti aami ifọkansi ti o ga julọ ti a lo ninu wiwọn nipasẹ Ipele Itọka Aṣayẹwo (DOL). Idojukọ yii ṣe itọsọna agbara inudidun LED ti a lo lakoko wiwọn. Ibi-afẹde naa jẹ fun tente oke Solusan Deede lati de isunmọ ifihan agbara fluorescence kanna amplitude bi ifọkansi analyte ti o ga julọ.
Tọkasi apẹrẹ ifọkansi ojutu Normaization ninu itọsọna akọkọ lati ṣeto awọn iye akọkọ. Ṣe akiyesi pe chart ṣe itọsọna awọn eto ibẹrẹ, ṣugbọn agbara inudidun LED le ṣe atunṣe siwaju lakoko idagbasoke idanwo.

Didara Cell ati Igbaradi

Ṣiṣeeṣe sẹẹli yẹ ki o wa loke 95%, ati pe awọn sẹẹli yẹ ki o wa ni ipo ti o dara ni gbogbogbo. Fun awọn sẹẹli ti o tẹle, a ṣeduro ṣiṣẹ pẹlu awọn sẹẹli ti o jẹ 50-70% confluent.
Fun awọn sẹẹli idadoro, a ṣeduro ikore ni ipele aarin-log ti idagbasoke. 50 µl ti idaduro sẹẹli ni 1E+06 awọn sẹẹli/mL ni a nilo fun ṣiṣe.

ikore awọn sẹẹli idadoro

Centrifuge isunmọ. Awọn sẹẹli 2E + 06 ni 300 g fun awọn iṣẹju 7 lati yọ media asa sẹẹli kuro. Jabọ awọn supernatant.
Wẹ awọn sẹẹli naa ni ẹẹkan nipasẹ didaduro pellet sẹẹli ni isunmọ. 1 milimita ti DPBS. Centrifuge idadoro ni 400 g fun awọn iṣẹju 5 lati pellet awọn sẹẹli alãye. Fi iṣọra sọ atupa kuro lati yọ awọn ajẹkù ati media kuro.

Ni rọra tun daduro ni 1 milimita ti DPBS, gbe idadoro si oke ti strainer sẹẹli ki o si fa idaduro naa nipasẹ sisan walẹ.
Ṣe iwọn ifọkansi sẹẹli ti idadoro igara ati ṣatunṣe si awọn sẹẹli 1E+06/mL.
- Imọran: Diẹ ninu awọn sẹẹli idaduro duro lati dagba awọn iṣupọ. Rọra da awọn iṣupọ duro ki o si pẹlu igbesẹ igara ṣaaju igbesẹ centrifugation akọkọ.
- Lo awọn italologo pipette jakejado nigba mimu awọn idaduro sẹẹli mu lati yago fun awọn ipa irẹrun giga lakoko gbigbe tabi ifasilẹ.

Ikore awọn sẹẹli ti o tẹle

Fọ awọn sẹẹli pẹlu DPBS ti o ni ifo ilera.
Ya awọn sẹẹli kuro ninu ọpọn asa nipa lilo reagent itusilẹ ti o fẹ (fun apẹẹrẹ TrypLE).
Da awọn sẹẹli ti o yapa pada si iwọn didun media ti o fẹ ki o ṣe àlẹmọ pẹlu strainer sẹẹli 30 nm.

Ni iyan, ṣafikun EDTA ni ọran ti awọn sẹẹli ti o faramọ (ifojusi ipari 5 mM).
Centrifuge awọn sẹẹli ni 300 g fun awọn iṣẹju 7 lati yọ media asa sẹẹli kuro. Jabọ awọn supernatant.
Da awọn sẹẹli pada si 1 milimita ti DPBS.
Ṣe iwọn ifọkansi sẹẹli ati ṣatunṣe si awọn sẹẹli 1E+06/mL.
- Imọran: Awọn media ti o fomi 1:4 pẹlu DPBS le ṣee lo lati ṣafikun awọn eroja si awọn sẹẹliamples ni irú ti kókó ẹyin tabi gun assay bisesenlo.

Iṣatunṣe sẹẹli

Centrifuge to awọn sẹẹli 10E+06 ni 300 g fun awọn iṣẹju 7 lati yọ media asa sẹẹli kuro. Jabọ awọn supernatant.
Tun pellet sẹẹli duro ni 1 milimita PBS, centrifuge ki o si sọ ohun ti o ga julọ silẹ.

Tun pellet sẹẹli duro ni 500 µL PBS/2% PFA (62.5 µL ti 16% ojutu PFA + 437.5 µL PBS).
Wọ awọn sẹẹli naa ni iwọn otutu yara fun iṣẹju mẹwa 10 (pẹlu gbigbọn pẹlẹpẹlẹ).
Fi 500 µL ti PBS kun ki o si centrifuge idadoro ni 400 g fun iṣẹju 5 lati yọ PFA kuro.

Jabọ awọn supernatant.
Tun awọn sẹẹli da duro ni 1 milimita PBS, ṣe àlẹmọ nipasẹ 30 µm cell strainer, centrifuge (400 g, 5 min) ki o si sọ supernatant kuro.
Da awọn sẹẹli duro ni iwọn 1 milimita ti PBS (aṣayan: ṣatunṣe si ifọkansi ikẹhin ti awọn sẹẹli 5E+06/mL).
Tọju awọn sẹẹli ti o wa titi ni 2-8 ° C, lo laarin oṣu kan.
- Ti o ba yẹ ki o wa awọn sẹẹli diẹ sii, jọwọ gbe gbogbo iye soke ni ibamu.
- AKIYESI: Iyara centrifugation lakoko ikore awọn sẹẹli le ṣe atunṣe si iru sẹẹli, ti awọn sẹẹli ba ni itara ati awọn agbara g-kekere ni a lo nigbagbogbo.
- Ifojusi PFA le jẹ iyatọ laarin 0.5 ati 4%.

SIC Assay iṣeto

Awọn igbelewọn scIC atẹle yẹ ki o wa ninu idagbasoke idanwo ati pe o le tun ṣe laarin awọn ṣiṣan iṣẹ ayẹwo nigbamii lori.

Ṣiṣan iṣẹ idagbasoke ayẹwo ti pin si awọn igbesẹ itẹlera 3 ọtọtọ:

Cyto ërún igbeyewo
Ṣe ayẹwo idanwo nikan
Ayẹwo Kinetics

Cyto Chip Idanwo

Didara chirún tuntun nilo lati ṣe ayẹwo ṣaaju lilo chirún cyto ni wiwọn kan. Bẹrẹ nipasẹ ṣiṣe Idanwo Chip Cyto lọtọ. Wo Helix cyto chip ipin ninu itọsọna akọkọ lori bi o ṣe le ṣeto ati ṣe ayẹwo idanwo chirún kan.

Itupalẹ Nikan Idanwo

Idagbasoke idanwo scIC kan bẹrẹ pẹlu Idanwo Itupalẹ Nikan, eyiti o ṣe iṣiro ihuwasi ti awọn atunnkanwo aami fluorescently lori ilẹ chirún tuntun laisi awọn sẹẹli.

Idanwo yii tun le tun ṣe lorekore lati ṣe ayẹwo iduroṣinṣin ti awọn atupale aami. Idanwo SIC Analyte Nikan ni a le tunto ni awọn igbelewọn Kinetics nipa ṣiṣe apoti ayẹwo Analyte nikan labẹ awọn eto sẹẹli.
Fun igbelewọn didara atupale, ifọkansi ti a lo ti o ga julọ ti to ati pe o le tunto nipasẹ piparẹ gbogbo ṣugbọn ọkan ninu awọn ẹgbẹ ninu idanwo naa.

Kinetics Assay Iṣeto Ṣiṣan iṣẹ

Ayẹwo kinetics jẹ deede lilo laarin iṣan-iṣẹ adaṣe adaṣe ti o ni awọn igbelewọn idasile data mejeeji gẹgẹbi awọn eroja itọju. Ni kete ti itupalẹ naa ti kọja idanwo iṣakoso didara Analyte nikan, o le ṣee lo ni wiwọn lori awọn sẹẹli.

To quantify kinetic rates reliably, the signal response during association should be concentration-dependent, increasing with higher analyte concentrations.
Idojukọ ti o ga julọ yẹ ki o de ibi pẹtẹlẹ kan, eyiti o tọka si pe a ti ṣaṣeyọri ipo iduroṣinṣin. Iyapa naa nilo lati ṣiṣẹ ni pipẹ to lati yọkuro ipin pataki ti analyte dè (diẹ sii ju 5%) lati jẹ ki ibamu ibamu ti ohun tẹ naa.
Lo awọn paramita aiyipada ni awọn ipo idanwo bi aaye ibẹrẹ ati ṣatunṣe siwaju da lori awọn abajade rẹ.

Example 1. Niyanju assay bisesenlo

Ṣiṣan iṣẹ ayẹwo n gba awọn olumulo laaye lati ṣe wiwọn isinyi ati awọn ọna itọju ti o da lori awọn iwulo esiperimenta pato wọn.

Ṣiṣan iṣẹ ayẹwo le pẹlu awọn igbesẹ wọnyi ni aṣẹ itọkasi:

NOMBA (Erún Itọju)
SIC Kinetics (Awọn sẹẹli A, Analyte A, Chip Cyto)
Fifọ Eto (Erún Itọju)
SIC Kinetics (Awọn sẹẹli B, Analyte A, Chip Cyto)
Fifọ Eto (Erún Itọju)
Itupalẹ atunto scIC Kinetics nikan (Analyte A, Chip Cyto)
- Awọn igbesẹ NOMBA ati Eto Wẹ ni a ṣe lori Chip Itọju kan. Fifọ Eto kan wa nigbati o ba yipada si laini sẹẹli ti o yatọ ati ṣaaju ṣiṣe Idanwo Itupalẹ Nikan ni opin ṣiṣan iṣẹ.
- Fun alaye diẹ sii, tọka si apakan lori fifọ eto Cyto ninu itọsọna akọkọ.
- Nigbati o ba n ṣe awọn igbelewọn kinetics lori awọn sẹẹli, ronu ṣiṣeeṣe sẹẹli, eyiti o da lori laini sẹẹli.
- Fun awọn laini sẹẹli ti o ni itara, o gbaniyanju lati ṣiṣe awọn igbelewọn 1-2 nikan fun ṣiṣiṣẹ iṣẹ ayẹwo. Fun awọn laini sẹẹli resilient diẹ sii, awọn igbelewọn afikun le wa ni ila.
- AKIYESI: Fun awọn igbelewọn afikun, mura ojutu sẹẹli ni awọn lẹgbẹrun lọtọ nipa sisọ orukọ awọn sẹẹli ni oriṣiriṣi.
- Rii daju pe gbogbo awọn reagents jẹ alabapade ati tilẹ nipasẹ àlẹmọ 0.22 µm kan. Nikẹhin, gbe awọn reagents ti a pese silẹ sinu ohun elo bi a ti fun ni aṣẹ nipasẹ heliOS.
- Iṣiṣẹ naa le bẹrẹ nipasẹ titẹ itọka buluu “Ṣiṣe” aami ati tẹle awọn igbesẹ ni Assay Start Wizard.
- Ni kete ti ṣiṣe naa ti bẹrẹ, ẹrọ naa n ṣiṣẹ ni ominira titi gbogbo iṣan-iṣẹ assay yoo pari.

Onínọmbà ti awọn adanwo scIC

SIC Analysis Workflow

Awọn data scIC le yato si data biosensor boṣewa nitori idiju adayeba ti awọn iṣẹlẹ ti o waye lori awọn sẹẹli ti o mu lori ibi-pipẹ heliXcyto, eyiti o le ja si awọn aiṣedeede sensọgram.

Nitorinaa, iṣakoso didara ni a tẹnumọ fun awọn aworan ti o mu ni igbesẹ wiwọn kọọkan ati fun awọn sensọ ti ipilẹṣẹ ni oju-iwe ibalẹ ti itupalẹ adaṣe.
Ni afikun, heliOS pese awọn irinṣẹ lati koju awọn aiṣedeede sensọgram lakoko itupalẹ data afọwọṣe scIC.

Ilana itupalẹ data scIC:

Ayewo Aworan:
- Ṣayẹwo gbogbo awọn aworan ti o mu jakejado wiwọn (Taabu awọn aworan ni window idanwo).
- Awọn sẹẹli melo ni o wa ni iduroṣinṣin ninu awọn ẹgẹ jakejado gbogbo iwọn?
- Kini ipo ti awọn sẹẹli naa? Ṣayẹwo fun granularity ati iduroṣinṣin sẹẹli.
- Ṣe awọn ẹgẹ naa mọ lẹhin igbesẹ isọdọtun?

Ṣayẹwo data aise:
- Ṣayẹwo data aise fun aaye itọkasi 1 ati aaye wiwọn 2
- Ifihan agbara ti tente oke deede yẹ ki o sunmọ tabi ga julọ ju ifihan data aise ti o ga julọ.
- Ṣe ifihan agbara naa pada si ipele ipilẹ lori awọn aaye mejeeji, tabi ẹri wa ti isọdọkan pato bi?
Ṣayẹwo data deede:
- Njẹ awọn fo abẹrẹ fun aaye 1 ati iranran 2 n bora daradara bi?

Ṣayẹwo Data Itọkasi:
- Ṣe igbesẹ isọdọtun naa mu ifihan agbara pada si ipilẹ bi? Ti kii ba ṣe bẹ, ṣayẹwo boya awọn sẹẹli tabi idoti wa ninu awọn ẹgẹ lẹhin isọdọtun nipasẹ atunṣeviewawọn aworan.
- Njẹ awọn spikes, awọn ita, tabi awọn aiṣedeede miiran wa ninu awọn ifọwọ ti itọkasi bi? Ti o ba jẹ bẹ, tunview awọn aworan lati ṣe idanimọ awọn okunfa ti o pọju ati gbero awọn atunṣe afọwọṣe.

Ṣayẹwo Fit Data:
- Ṣiṣe ayẹwo didara wiwo
- Ṣe ibamu ni deede ṣapejuwe ihuwasi ti awọn iyipo, tabi ṣe laini ibamu kọja sensọgram naa?
- Ṣe ibamu ni deede ṣe apejuwe ìsépo ti data naa?
- Se na amplitude ni ibamu pẹlu awọn itọkasi data?

SIC Aládàáṣiṣẹ Data Analysis

Awọn itupalẹ adaṣe adaṣe scIC n ṣe ilana data aise si awọn igbero iṣakoso didara ati data ibamu ni awọn jinna diẹ.
1. Ṣii idanwo scIC nipasẹ titẹ-lẹẹmeji lori idanwo ti o yan ni Akojọ Idanwo
2. Tẹ bọtini Itupalẹ buluu nla ni isalẹ ti taabu idanwo naa.
3. Lati iṣan-iṣẹ idanwo, yan idanwo ti o fẹ lati ṣe itupalẹ.
4. Yan Kinetics scIC lati awọn oriṣi itupalẹ ti o wa ki o tẹ Itele.
  - AKIYESI: Ti idanwo naa ba tun nṣiṣẹ, awọn igbelewọn ti o pari nikan ni yoo han ninu atokọ naa. Ni kete ti o ba yan idanwo, window atẹle yoo ṣafihan gbogbo awọn iru itupalẹ ti o wa ni pato si ọna / iṣiro ti a lo.
5. Ti o ba nilo, tunto onínọmbà ni window atẹle. Awoṣe ibamu ti aipe jẹ “Kinetics – Ipele ipari ọfẹ” pẹlu apoti “Ipele ipari ipele ti ipa si Zero” ti mu ṣiṣẹ. Yapa lati awoṣe yii nikan ti isedale tabi data ba nilo apejuwe eka sii.
6. Ni kete ti iṣeto ba ti pari, tẹ Itupalẹ lati wo gbogbo awọn aworan ifaworanhan ti ari, aise ati awọn sensọ ti a ṣe ilana, ati awọn iye kainetics.
Nitori idiju atorunwa ti awọn samples ti a lo fun awọn idanwo scIC, awọn sensọ ti o mu abajade le ni awọn aiṣedeede.

Lati koju eyi, iṣakoso didara ti awọn aworan ati awọn sensọ ti wa ni tẹnumọ ninu itupalẹ adaṣe.
Ti o ba nilo awọn atunṣe afọwọṣe tabi itupalẹ ijinle diẹ sii, awọn irinṣẹ fun awọn atunṣe artifact ni a pese laarin Scratchpad itupalẹ afọwọṣe.

heliXcyto Itọju ati Decontamination

itọju heliXcyto ṣe pataki lati rii daju iṣẹ ṣiṣe to dara julọ ati igbesi aye gigun. Itọju deede pẹlu awọn ilana mimọ ti o ṣe idiwọ idoti ati ṣetọju iduroṣinṣin ti eto naa, ṣiṣe awọn abajade deede ati iṣẹ didan. Itọju deede jẹ pataki fun igbẹkẹle ohun elo ati didara awọn abajade esiperimenta.
Itọju heliXcyto ni awọn ilana bọtini meji: Cyto System Wash, eyiti o le ṣepọ taara sinu iṣan-iṣẹ assay, ati Clean & Sleep, eyiti a ṣe bi iṣẹ ṣiṣe lọtọ lati ṣetọju ohun elo ṣaaju lilo lẹhin wiwọn alẹ to gun ti tẹlẹ tabi nigbati ko si ni lilo fun diẹ sii ju awọn ọjọ 2 lọ.

Wẹ Eto mejeeji ati mimọ & Orun nilo wiwa Chip Itọju heliX® kan ninu atẹ chirún.

Mọ & Orun baraku

Ilana mimọ & Oorun jẹ itumọ fun mimọ ati tiipa ẹrọ / ibi ipamọ. Ọna naa n fọ ọpọn omi ti ẹrọ heliX® ni akọkọ pẹlu omi ultrapure ati lẹhinna pẹlu 70% ethanol. Nikẹhin, gbogbo awọn tubes ti wa ni idasilẹ pẹlu afẹfẹ.
Ilana mimọ yii jẹ adaṣe ni kikun ati gba to iṣẹju 40. Lakoko ilana, ethanol ti wa ni itusilẹ sinu igo omi, nitorinaa awọn akoonu inu igo naa yẹ ki o sọnu lẹhinna.

Lẹhin Mimọ & Orun, ohun elo naa wọ inu ipo oorun ati pe ko le ṣee lo titi ti Jiji & Prime yoo ṣe. Chip Itọju heliX® kan nilo fun awọn ṣiṣe mejeeji.
PATAKI: Lati yago fun idoti tube, rii daju pe o sọ awọn akoonu inu igo omi naa silẹ (adapọ omi / ethanol) ki o sọ eiyan egbin kuro lẹhin ilana mimọ.

Tiipa ati ipamọ igba pipẹ

Fun awọn akoko ti o gbooro sii ti kii ṣe lilo, jọwọ yọ igo ti o ni omi ati ethanol kuro lẹhin Ilana Mimọ & Orun lati inu apẹja ifipamọ ati ki o lọ kuro ni tubing ti o farahan si afẹfẹ.

Tun yọ heliX® Chip Itọju kuro, ki o tọju sinu apo atilẹba rẹ. Eyi ṣe idilọwọ sisan pada ati idoti. Agbara pa ẹrọ.

Cyto eto w

heliXcyto System Wẹ ni sanlalu nu awọn microfluidic eto nipa lilo Cleaning Solusan 3 (CS3) ni papa ti nipa 45 iṣẹju. CS3 ti gbe soke ni meji stages. Abẹrẹ akọkọ ati sample loop ti kun ati ki o wa ni abeabo lati yọ eyikeyi contaminants kuro.
AKIYESI: Ṣiṣe Wẹ System Cyto kan o kere ju lojoojumọ nigbati ẹrọ ba wa ni lilo. A ṣeduro lati ṣafikun ọna Fifọ System Cyto si iṣan-iṣẹ ṣiṣayẹwo boya lẹhin idanwo kọọkan (nigbati o ba yipada si laini sẹẹli tuntun tabi ti sample didara jẹ suboptimal) tabi si opin ti ohun assay bisesenlo. Chip itọju paṣipaarọ lẹhin iwọn ti o pọju 50 Awọn fifọ System Cyto ti o han bi awọn isọdọtun ka ninu atẹ Chip view ti Iṣakoso ẹrọ.

Olubasọrọ

Ìmúdàgba Biosensors GmbH
Perchtinger Str. 8/10
81379 München
Jẹmánì
Bruker Scientific LLC
40 Manning Road, Manning Park
Billerica, MA 01821

USA

Bere fun Alaye order.biosensors@bruker.com
Oluranlowo lati tun nkan se support.dbs@bruker.com
www.dynamic-biosensors.com
Awọn ohun elo ati awọn eerun igi jẹ iṣelọpọ ati iṣelọpọ ni Germany.
Fun Lilo Iwadi Nikan. Kii ṣe fun lilo ninu awọn ilana iwadii ile-iwosan.

FAQ

SIC FAQs

Ṣe MO le tun lo chirún heliXcyto bi?

Bẹẹni, chirún heliXcyto jẹ atunlo ati isọnu. Tẹle awọn ilana mimọ ati ibi ipamọ to dara.

Kini idi ti Chip Itọju naa?

Chip Itọju jẹ lilo fun mimọ, idanwo, ati awọn iṣẹ itọju lati rii daju iṣẹ ṣiṣe to dara ti eto naa.

Igba melo ni MO yẹ ki n nu ẹrọ naa mọ?

Eto iṣan omi ti heliXcyto ti wa ni mimọ pẹlu fifọ System Cyto ati Awọn ọna mimọ&Orun. Eto microfluidic ni a ṣe iṣeduro lati sọ di mimọ nipasẹ Cyto System Wash lori Chip Itọju lẹhin idanwo kọọkan (paapaa nigbati o ba yipada iru sẹẹli) tabi tuntun ni ipari ṣiṣiṣẹ iṣẹ ayẹwo. Ilana Mimọ&Orun ni lati lo ni kete ṣaaju lilo lẹhin wiwọn gigun ti tẹlẹ (fun apẹẹrẹ ni owurọ lẹhin idanwo alẹ kan) tabi nigbati heliXcyto kii yoo wa ni lilo fun diẹ sii ju tiipa ọjọ meji lọ.

Bawo ni pipẹ awọn ojutu: RB 1 / omi / CS 1 / CS 3 / ojutu deede ti wa ni ipamọ ninu ẹrọ naa?

Ni gbogbogbo, ṣaaju wiwọn kọọkan, gbogbo awọn ojutu ni lati ṣe ayẹwo fun iwọn to ku ati fun turbidity tabi ojoriro ti o pọju. Ni iru idi eyi ojutu nilo lati paarọ lẹsẹkẹsẹ. Omi ati RB 1 ni lati paarọ rẹ lojoojumọ ati RB 1 ni lati ṣe sisẹ ṣaaju wiwọn kọọkan. Ojutu Normalisation ti fomi le ṣee lo fun awọn ọjọ 2 ni ọna kan. Awọn ojutu mimọ jẹ iduroṣinṣin fun isunmọ awọn ọjọ mẹta.

Igba melo ni MO le lo chirún heliXcyto?

Ọjọ ipari ti chirún heliXcyto ni a le ṣayẹwo ni taabu Chip tray ni apakan Ẹrọ ni heliOS. Ko si iṣeduro fun iṣotitọ ërún le ṣee fun lẹhin ọjọ ipari. Bibẹẹkọ, niwọn igba ti awọn ẹgẹ naa ba wa ni iduroṣinṣin, dada jẹ mimọ, ati ẹhin didan wa ni isalẹ gige-pipa ti a tọka si ninu Idanwo Chip, a gba pe chirún naa ni lilo fun awọn wiwọn. Ṣiṣe mimọ ni chip ita deede (Kit Cleaning Chip CCK-1-1 ni a ṣe iṣeduro lati ṣe lẹhin lilo chirún lati pẹ ni igbesi aye chirún ni pataki.

Igba melo ni MO le lo ërún Itọju?

Chip Itọju ni a nilo lati paarọ rẹ lẹhin awọn iwẹ eto 50 (ti a ka bi awọn isọdọtun ninu taabu Chip tray ti iṣakoso Ẹrọ ni heliOS).

Igba melo ni o yẹ ki o ṣe Idanwo Chip heliXcyto?

Idanwo Chip n gba alaye nipa abẹlẹ fluorescence, mimọ, ati iduroṣinṣin ti chirún ṣaaju ki o to bẹrẹ idanwo tuntun kan. O ti wa ni ošišẹ ti ni o kere lẹẹkan nigbati a titun ni ërún ti wa ni lilo, sugbon ti wa ni niyanju lati wa ni ošišẹ ti ṣaaju tabi ni awọn ibere ti kọọkan ṣàdánwò lati ṣayẹwo awọn ipo ti awọn ërún. Eyi ngbanilaaye awọn ipo wiwọn lati ṣatunṣe ati awọn aiṣedeede ninu awọn sensọ lati tọpa si chirún tabi ẹrọ.

Kini kemistri isamisi analyte?

Awọ Fuluorisenti pupa tabi alawọ ewe, ni atele, jẹ pọ pẹlu awọn ohun elo isamisi wa nipasẹ NHS-esters si amines akọkọ ninu awọn itupalẹ amuaradagba (fun apẹẹrẹ lysine tabi N-terminus). Awọn alaye ati apakan laasigbotitusita ni a le rii ninu heliXcyto Labeling Kit wa dye pupa (Labeling Kit red dye 2 CY-LK-R2-1) ati heliXcyto Labeling Kit green dye (Labeling Kit green dye CY-LK-G1-1 ) awọn itọnisọna lati ọdọ wa webitaja.

Nibo ni lati wa awọn iwe-ẹri heliOS ati alaye iwe-aṣẹ?

Ilana ti titẹ awọn iwe-ẹri ati alaye iwe-aṣẹ jẹ apejuwe ninu apakan fifi sori heliOS ni itọsọna heliXcyto lati ọdọ wa webojula (heliXcyto itọsọna). Alaye iwe-aṣẹ rẹ yẹ ki o wa ni fipamọ sinu folda scIC lori heliXcyto PC Desktop, eyiti Aṣoju Ohun elo wa ṣẹda lakoko ikẹkọ.

Kini awọn sakani itusilẹ / itujade ti heliXcyto?

Idunnu ni pupa jẹ 605-625 nm, itujade (iwari) jẹ 655-685 nm. Idunnu ni alawọ ewe 490-510 nm, itujade ni alawọ ewe jẹ 525-575 nm.

Igba melo ni MO ni lati wiwọn idanwo kanna fun igbẹkẹle iṣiro?

Lati ṣaṣeyọri awọn oṣuwọn kainetik apapọ igbẹkẹle, awọn atunwi 3-4 ti awọn wiwọn Kinetics-fojusi 3 ni a gbaniyanju lati ṣe ni iye sẹẹli isokan. Ninu eto data ti o ni ibamu, idapọ ati awọn oṣuwọn ipinya ti awọn ẹda yẹ ki o wa laarin awọn akoko 2-4 window.

Kini ifamọ ti awọn wiwọn scIC?

Iwọn wiwa isalẹ ni awọn ofin ti ikosile ibi-afẹde da lori isamisi analyte, ṣugbọn ni igbagbogbo scIC le ṣe iwọn awọn kinetik tẹlẹ lori diẹ bi awọn ohun elo 1000-10000 fun sẹẹli kan. Lati mu ifamọ pọ si, o kere ju awọn sẹẹli 5 ni a gbaniyanju lati mu, ati itupalẹ DOL ti 5-10 ati agbara LED ni lati jẹ iwọntunwọnsi lati ṣaṣeyọri awọn iṣiro fluorescence ti o pọju.

Kini awọn opin wiwa ti heliXcyto ni awọn ofin ti awọn oṣuwọn kainetik?

Jọwọ tọka si awọn alaye imọ-ẹrọ ti heliXcyto fun awọn opin imọ-ẹrọ ti o pọ julọ julọ, eyiti o le rii ninu itọsọna heliXcyto (itọsọna heliXcyto). Iyapa ibakan Kd: 10 pM to 1 mM Association oṣuwọn ibakan kon: 1E3 to 1E7 M-1s-1 Dissociation oṣuwọn ibakan koff: 1E-6 to 1 s-1 Fun alaye alaye jọwọ ṣayẹwo wa heliXcyto guide lati wa webojula.

Awọn iwe aṣẹ / Awọn orisun

ìmúdàgba BIOSENSORS heliX cyto Ni kikun aládàáṣiṣẹ yàrá Analysis System [pdf] Afowoyi olumulo
heliX cyto Ni kikun Eto Iṣayẹwo yàrá adaṣe, heliX cyto, Eto Iṣayẹwo yàrá adaṣe adaṣe ni kikun, Eto itupalẹ yàrá adaṣe adaṣe, Eto itupalẹ yàrá, Eto itupalẹ, Eto

Awọn itọkasi

Itọsọna olumulo

ìmúdàgba BIOSENSORS heliX cyto Ni kikun aládàáṣiṣẹ yàrá Analysis System

ọja Alaye