kraftmiklir BIOSENSORS heliX cyto fullkomlega sjálfvirkir rannsóknarstofugreiningarkerfi

Tæknilýsing

• Vöruheiti: heliX frumu
• Framleiðandi: Dynamic Biosensors GmbH
• Útgáfa: 1.0

Upplýsingar um vöru

• HeliX frumuboðefnakerfið er hannað fyrir víxlverkunarfrumugreiningu á einum frumu (scIC) til að mæla bindingarhraða flúrljómandi sameinda við skotmörk á frumuyfirborði á tímagreindan hátt.

Notkunarleiðbeiningar fyrir vöru

Að nota heliXcyto flís

• HeliXcyto örgjörvinn inniheldur eina örvökvarás með rafskautspunktum fyrir frumufangun og mælingar. Gakktu úr skugga um rétta staðsetningu örgjörvans og fylgdu leiðbeiningunum um frumufangun.

Viðhaldsflís

• Notið viðhaldsflísinn eingöngu til þrifa, prófana og viðhalds. Forðist að nota hann í tilraunum til að koma í veg fyrir mengun.

Running Buffer

• Notið Running Buffer 1 (RB 1) við mælingar. Vísið til scIC samhæfingarblaðsins í aðalhandbókinni fyrir nánari upplýsingar.

Sensorgram greining

• Fylgist með skynjaramyndinni í rauntíma í heliOS hugbúnaði meðan á mælingum stendur. Greinið flúrljómunarviðbrögðin með tímanum til að draga fram hvarfhraða.

Aðgerðarleysi

• Íhugaðu að nota óvirkjun sem valfrjálst skref til að koma í veg fyrir aðsog greiningarefnisins með því að rækta óvirkjunarhvarfefni á flísinni.

Normalization

• Stöðlun er ferli til að staðla gögn til samanburðar og greiningar. Fylgið staðlunarferlum samkvæmt notendahandbókinni.

INNGANGUR

• Þessi handbók er ætluð sem stutt yfirlitview um heliXcyto kerfið og möguleika þess. Öllum köflunum er útskýrt nánar í aðalleiðbeiningum heliXcyto sem er að finna á https://www.dynamic-biosensors.com/helios-download-latest/

heliXcyto hugtök einfrumuvíxlverkun Frumufræði

• Einfrumuvíxlverkunarfrumumæling (e. single-cell interaction cytometry (scIC)) er tækni sem mælir bindingarhraða flúrljómandi sameindar (greiningarefnis) við mark (ligand) á frumuyfirborði með því að taka upp flúrljómandi merki með tímaupplausn.

Analyte

• Greiningarefni er flúrljómandi sameind í hreyfanlegri fasa sem getur bundist við skotmark á yfirborði frumu.

Ligand

• „Ligand“ er heitið sem notað er í heliOS hugbúnaðinum til að lýsa markmiði á frumuyfirborði sem greiningarefni getur bundist við. Þetta getur verið viðtakasameind, lípíð, sykur eða önnur frumuyfirborðsameind.

Frumugildra

• Frumugildrur eru flæðigegndræpar, lífsamhæfar fjölliðubúr á heliXcyto flís. Þær eru hannaðar til að fanga og festa frumur af mismunandi stærðum, frá um 6 til 25 µm, í flæðisrásinni. Frumugildrur eru fáanlegar í þremur mismunandi stærðum: litlum, meðalstórum og stórum.

heliXcyto flís

• heliXcyto flísar innihalda eina örflæðisrás með opum hvoru megin. Tveir gullnir rafskautsblettir eru staðsettir í miðri rásinni.
• Einn bletturinn þjónar sem viðmiðunarblettur og hinn bletturinn inniheldur þrívíddar lífsamhæf fjölliðubúr fyrir frumufangun og þjónar sem mæliblettur. Mælibletturinn getur innihaldið 1 eða 5 gildrur af sömu gerð.
• Viðmiðunarpunkturinn gerir kleift að vísa í rauntíma til söfnuðu flúrljómunarmerki. HeliXcyto örgjörvinn er endurnýtanlegur og einnota.

Viðhaldsflís

• Viðhaldsflísin er einrásar örvökvaflís sem notuð er fyrir allar þrif, prófanir og viðhaldsaðgerðir.
• Þessar aðgerðir fela í sér hreinsun og svefnrútínu, vekjara- og undirbúningsrútínu, kerfisþvott og vökvapróf. Þessa flís ætti ekki að nota í raunverulegar tilraunir með frumu-/próteinlausnir til að koma í veg fyrir frekari mengun flísarinnar.

Running Buffer

• Hlaupandi buffer er sá buffer sem notaður er í heliXcyto við mælingar. Almennt er mælt með notkun á hlaupandi buffer 1 (RB 1).
• Vinsamlegast skoðið samhæfingarblaðið fyrir scIC sem er að finna í aðalhandbókinni til að fá frekari upplýsingar.

Sensorgram

• scIC skynjaramynd er graf af flúrljómunarviðbrögðum í tölum á sekúndu (cps) yfir tíma, sem sýnir framvindu víxlverkunar á eða í frumum. Þessa feril má sjá. viewmælt í rauntíma í heliOS meðan á mælingunni stóð.
• Við greiningu á skynjaramyndum er best passað veldisvísisvísir við flúrljómunarferla ákvarðaður og hvarfhraðar (kon, koff) dregnir út.

Aðgerðarleysi

• Óvirkjun er valfrjálst skref í keyrslunni þar sem óvirkjunarefni er sprautað á flísina og ræktað til að loka yfirborðinu. Þetta getur hjálpað til við að koma í veg fyrir aðsog greiniefna á flísarefnin.

Normalization

• Stöðlunarskref er notað til að taka tillit til lítilsháttar mismunar á merkjum vegna þess að merki safnast frá hverjum mælipunkti með sérstökum skynjara. Flúrljómandi litarefni með ákveðnum styrk (byggt á hæsta greiningarefnisstyrk og merkingarstigi greiningarefnisins) er sprautað inn í upphafi prófunar. Þetta staðlunarskref er sjálfkrafa innifalið í mæliaðferðinni og mældur staðlunartoppur er notaður til að leiðrétta sjálfkrafa fyrir mismun milli skynjara við gagnagreiningu, áður en rauntímavísun er gerð.

Mælingarreglur scIC

scIC forrit

• Með því að mæla víxlverkunarfrumufræðilega greiningu á einum frumu (scIC) er hægt að mæla hvarfhraða og sækni flúrljómandi merkts greiningarefnis sem binst og losnar frá skotmarki sínu beint á lifandi frumum.
• Greining greiniefna í scIC er stærðaróháð og því viðeigandi fyrir allar sameindir frá undir-nm til > 100 nm og viðeigandi fyrir alla sameindaflokka allt frá litlum sameindum, peptíðum, aptamerum, nanóefnum, affiefnum, mótefnum, tvísértækum mótefnasniðum, próteinum, próteinfléttum, allt að blöðrum (exosomes), lípíðnanóögnum og veirum.

scIC tækni getur náð til eftirfarandi notkunarsviða:

• mæling á merki amplitudes í bindandi skjám
• Hreyfifræðileg greining á kon og koff hraða
• Mat á sækni og áhuga með Koff og tvífasa aðlögunarlíkönum
• sértæknipróf
• hlutfallsleg magngreining himnupróteina á frumuyfirborði
• Rannsóknir á epitópbindingu og samkeppni
• hömlunarprófanir
• Mat á innlimun markvissra próteina

Vélbúnaðargeta heliXcyto

Vökvakerfi

• Vökvakerfið í heliXcyto er fóðrað með allt að þremur mismunandi stuðpúðaflöskum, sem gerir kleift að breyta rekstrar- og viðhaldsstuðpúðanum. Hægt er að stilla dælurnar í heliXcyto á rennslishraða á bilinu 20 til 500 µL/mín, sem hentar mismunandi þörfum.ampKröfur um le og prófun. Flæðirás flísarinnar tengist vökvakerfinu í gegnum tvær opnanir. Vinstri opnunin er tengd við sample, stuðpúða og þvottaleiðslur, en opnunin hægra megin er tengd endurnýjunarleiðslunni.
• Þetta tvíhliða vökvakerfi gerir kleift að fanga stöðuga frumustarfsemi á meðan mismunandi skref mælinga eru keyrð og að lokum endurnýjun flísanna til að endurnýta flísina í prófuninni.
• Mynd 1. Flísasamþætting í Fluidic kerfi

Sjónkerfi

• Flúrljómunarmerkið er örvað með rauðum og grænum ljósdíóðum (LED) og greint með fjórum einfótonteljurum, sem safna rauðum og grænum merkjum frá hverjum bletti um alla dýpt rásarinnar.
• Hægt er að fylgjast með tveimur óháðum merkjum samtímis á sama mælistað, sem gerir kleift að mæla tvær víxlverkanir í einu í tvílita prófunaruppsetningu.
• Mynd 2. Uppsetning sjóntækja
• Sérstakt skynjara sér um að safna merkjum frá hverjum mælipunkti, sem getur leitt til lítilsháttar mismunar á hrátölum. Til að taka tillit til þessa er staðlunarskref sjálfkrafa tekið með í gagnaöflunarprófunum.
• Auk einstöku ljóseindamælinganna er tækið búið CCD myndavél og endurspeglunarljóssmásjá. Þessi tæki gera kleift að taka rauntíma frumumyndir, sem gerir kleift að meta heilleika frumna og gæði greiningarefnisins allan tímann.
• Þessi samsetta uppsetning tryggir að bæði víxlverkunum og líffræðilegum aðstæðum sé fylgst með, sem veitir ítarlegt mat á tilrauninni.

scIC vinnuflæði

Mælingarferlið scIC má skipta niður í þrjú lykilþrep

1. Tilraunahönnun í heliOS: Hver mæling hefst með því að hanna tilraunina í heliOS hugbúnaðinum. Verkflæði greiningarinnar er sett upp með því að velja fyrirfram skilgreindar aðferðir og aðlaga tilraunabreytur, svo sem frumulínu sem notuð er, styrk greiningarefnisins og skilyrði stuðpúða. heliOS reiknar sjálfkrafa út nákvæmt magn frumna, greiningarefna, stuðpúða og annarra lausna sem nauðsynlegar eru fyrir mælinguna, sem hagræðir undirbúningsferlinu.
2. Undirbúningur stuðpúða, greiningarefna og frumna: Eftir að tilraunahönnunin er kláruð eru nauðsynleg efni útbúin samkvæmt forskriftum heliOS. Stuðpúðar, greiningarefni og frumur eru settar í tækjasjálfvirka búnaðinn.amplesa.
3. Mælingar og gagnagreining: Kerfið framkvæmir áætlaða röð sjálfvirkra rauntíma gagnvirknimælinga án frekari íhlutunar frá notandanum. Hægt er að greina gögn á meðan mælingin er enn í gangi til að fá strax innsýn í niðurstöðurnar.

scIC prófanir í heliOS

Auk gagnaöflunarprófana býður hugbúnaðurinn einnig upp á aðferðir til að prófa flísar, þrífa og viðhalda tækjum.

Tafla 1. Staðfestar gagnaöflunarprófanir

scIC Hreyfifræði	Mælir fulla hvarfhraða frumna með tengingu greiningarefnisins sem er stillanlegur á milli 1 og 5 styrkleika, og fylgt eftir með einni sundrun eftir hæsta styrk. Annað hvort græn eða rauð rásin. Inniheldur möguleika á eingöngu greiningarefnisprófi.
scIC Hreyfifræði – Tvöfaldur litur	Mælir fulla hvarfhraða frumna með tengingu greiningarefnis sem er stillanlegur á milli 1 og 5 styrkleika, og síðan einni sundrun eftir hæsta styrk. Bæði græna og rauða rásin eru virkjuð samtímis. Inniheldur möguleika á prófun á eingöngu greiningarefni.
scIC sundrun – tvílitur	Mælir sundrun greiningarefnis frá frumum sem hafa verið forræktaðar með flúrljómandi merktum greiningarefni með grænum og/eða rauðum rásum.

Undirbúningur og þróun greiningar fyrir scIC mælingar

Það eru nokkur atriði sem þarf að hafa í huga áður en scIC mæling er sett upp

• Styrkur greiningarefnis, merkingarstig, eiginleikar og gæði.
• Stöðlunarlausn og örvunarafl.
• Gæði og meðhöndlun frumna.

Styrkur greiningarefnis og merkingarstig

• Samkvæmt hefðbundnum starfsháttum við hvarfhraðamælingar mælum við með að velja mólarþéttni greiningarefnisins á bilinu 0.1 til 10 sinnum væntanlegur jafnvægisdreifingarstuðull (Kd) fyrir hvarfhraða margra styrkja. Fyrir hvarfhraða með einum styrk eða sundrunarmælingar ætti þéttni greiningarefnisins að vera á bilinu 1 til 10 sinnum væntanlegur Kd. Nauðsynlegt rúmmál greiningarefnisins, reiknað fyrir 10 mínútna tengitíma við rennslishraða 25 µL/mín., er samtals um það bil 300 µL.
• Merkingargráða (DOL) greiningarefnis ætti helst að vera 1, þó að DOL-gildi 2 eða 3 séu enn ásættanleg. Hins vegar skal hafa í huga að fleiri merkingar á greiningarefni geta haft áhrif á bindingareiginleika þess og aukið líkur á samloðun eða ósértækri bindingu. Til að ná sem bestum DOL skal fylgja verklagsreglunum sem fylgja merkingarsettunum sem innihalda rautt eða grænt litarefni úr hvarfefnalínunni frá heliXcyto.
  Normalization
• Stöðlun er fyrsta skrefið í öllum gagnaöflunaraðferðum. Hún bætir upp fyrir smávægilegar merkjabreytingar sem stafa af því að nota aðskilda skynjara fyrir hvern mælipunkt. Í þessu skrefi er flúrljómandi litarefni í notendaskilgreindum styrk sprautað inn í upphafi prófunarinnar.
• Styrkur eðlilegrar lausnar er reiknaður með því að margfalda hæsta styrk flúrljómandi merktra greiningarefnis sem notaður er í mælingunni með merkingargráðu greiningarefnisins (DOL). Þessi styrkur stýrir örvunarorku LED-ljóssins sem beitt er við mælinguna. Markmiðið er að tindur eðlilegrar lausnar nái nokkurn veginn sama flúrljómunarmerki. amplitude sem hæsti greiningarefnisþéttni.
• Vísað er í töfluna fyrir styrkleika staðlunarlausnar í aðalleiðbeiningunum til að stilla upphafsgildi. Athugið að taflan leiðbeinir upphafsstillingum, en hægt er að stilla örvunarorku LED-ljósa frekar meðan á þróun prófsins stendur.

Frumagæði og undirbúningur

• Frumulífvænleiki ætti að vera yfir 95% og frumurnar ættu almennt að vera í góðu ástandi. Fyrir viðloðandi frumur mælum við með að vinna með frumur sem eru 50-70% samflenndar.
• Fyrir frumusviflausn mælum við með uppskeru á miðjum log-vaxtarfasa. 50 µl af frumuusviflausn við 1E+06 frumur/ml er þörf í hverri keyrslu.

Uppskera sviflausnarfrumna

1. Skiljið um það bil 2E+06 frumur við 300 g í 7 mínútur til að fjarlægja frumuræktunarmiðilinn. Fargið ofanfljótandi vökvanum.
2. Þvoið frumurnar einu sinni með því að leysa upp frumukúluna í um það bil 1 ml af DPBS. Skilvindið blönduna við 400 g í 5 mínútur til að mynda kúlur úr lifandi frumunum. Fjarlægið ofanvökvann varlega til að fjarlægja brot og miðla.
3. Enduruppleysið varlega í 1 ml af DPBS, færið sviflausnina yfir frumusigti og síið sviflausnina með þyngdaraflsflæði.
4. Mælið frumuþéttni síaðrar sviflausnar og stillið hana á 1E+06 frumur/ml.
   • ÁBENDING: Sumar sviflausnarfrumur hafa tilhneigingu til að mynda klasa. Enduruppleysið klasana varlega og síið þá áður en fyrsta skilvinduskrefið er framkvæmt.
   • Notið pípettuodda með breiðum rifum þegar frumususpensar eru meðhöndlaðar til að forðast mikinn skerkraft við flutning eða endurblöndun.

Uppskera viðloðandi frumna

1. Þvoið frumur með dauðhreinsuðu DPBS.
2. Aðskiljið frumurnar frá ræktunarflöskunni með því að nota aðskilnaðarhvarfefni að eigin vali (t.d. TrypLE).
3. Enduruppleysið aðskildu frumurnar í æskilegu rúmmáli af miðli og síið með 30 nm frumusigti.
4. Hægt er að bæta EDTA við ef frumur eru mjög viðloðandi (lokastyrkur 5 mM).
5. Skiljið frumurnar við 300 g í 7 mínútur til að fjarlægja frumuræktunarmiðilinn. Fargið ofanfljótandi vökvanum.
6. Enduruppleysið frumurnar í 1 ml af DPBS.
7. Mælið frumuþéttni og stillið hana að 1E+06 frumur/ml.
   • ÁBENDING: Frumumiðill þynntur 1:4 með DPBS er hægt að nota til að bæta næringarefnum við frumur.ampef um viðkvæmar frumur er að ræða eða ef prófunarferlið er langt.

Frumufesting

1. Skiljið allt að 10E+06 frumur við 300 g í 7 mínútur til að fjarlægja frumuræktunarmiðilinn. Fargið ofanfljótandi vökvanum.
2. Enduruppleysið frumukúluna í 1 ml af PBS, skiljið eftir skilvindu og fargið ofanfljótandi vökvanum.
3. Enduruppleysið frumukúluna í 500 µL af PBS/2% PFA (62.5 µL af 16% PFA lausn + 437.5 µL af PBS).
4. Ræktið frumurnar við stofuhita í 10 mínútur (með léttum hristingi öðru hvoru).
5. Bætið 500 µL af PBS út í og ​​skilvindið sviflausnina við 400 g í 5 mínútur til að fjarlægja PFA.
6. Fleygðu flotinu.
7. Enduruppleysið frumurnar í 1 ml af PBS, síið í gegnum 30 µm frumusigti, skiljið frá (400 g, 5 mínútur) og hendið ofanvökvanum.
8. Enduruppleysið frumurnar í um 1 ml af PBS (valfrjálst: stillið að lokaþéttni 5E+06 frumur/ml).
9. Geymið fastar frumur við 2-8°C, notið innan mánaðar.
   • Ef laga þarf fleiri frumur, vinsamlegast aukið magnið í samræmi við það.
   • ATH: Hægt er að aðlaga skilvinduhraða við frumuuppskeru að frumugerð, ef frumurnar eru viðkvæmar og lægri g-kraftar eru almennt notaðir.
   • PFA-þéttni getur verið á bilinu 0.5 til 4%.

Uppsetning scIC prófunar

Eftirfarandi scIC prófanir ættu að vera innifaldar í þróun prófsins og hægt er að endurtaka þær innan prófunarferla síðar.

Verkflæði prófunarþróunar er skipt í þrjú aðskilin skref í röð:

1. Cyto flíspróf
2. Prófun á eingöngu greiningarefni
3. Hreyfifræðileg prófun

Cyto flíspróf

• Meta þarf gæði nýrrar flísar áður en frumuboðefni er notað í mælingu. Byrjið á að keyra frumuboðefnispróf sérstaklega. Sjá kaflann um Helix frumuboðefni í aðalhandbókinni um hvernig á að setja upp og meta flíspróf.

Aðeins greiningarefnispróf

• Þróun scIC prófunar hefst með aðeins greiningarefnisprófi, sem metur hegðun flúrljómandi greiniefna á fersku flísyfirborði án frumna.
• Þetta próf má einnig endurtaka reglulega til að meta stöðugleika merktra greiningarefna. Hægt er að stilla scIC Analysis Only Test í Kinetics assays með því að virkja gátreitinn Analysis only undir Cell settings.
• Til að meta gæði greiningarefnisins er hæsti styrkur sem notaður er nægjanlegur og hægt er að stilla hann með því að slökkva á öllum tengingum nema einni í prófuninni.

Uppsetning á verkflæði fyrir hvarfhraðagreiningu

• Hreyfihraðaprófið er venjulega notað innan sjálfvirks vinnuflæðis sem inniheldur bæði gagnaöflunarprófanir og viðhaldsþætti. Þegar greiningarefnið hefur staðist gæðaeftirlit með greiningarefni eingöngu er hægt að nota það í mælingum á frumum.
• To quantify kinetic rates reliably, the signal response during association should be concentration-dependent, increasing with higher analyte concentrations.
• Hæsti styrkurinn ætti að ná jafnvægi, sem gefur til kynna að jafnvægisástand bindingar hafi náðst. Sundrunin þarf að vera nógu löng til að losa verulegan hluta af bundnu greiningarefni (meira en 5%) til að gera áreiðanlega aðlögun ferilsins mögulega.
• Notið sjálfgefnu færibreyturnar í prófunarskilyrðunum sem upphafspunkt og aðlagið þær frekar eftir niðurstöðum.

ExampLeiðbeiningar 1. Ráðlagður vinnuflæði fyrir greiningu

Verkflæði prófunar gerir notendum kleift að setja mælingar og viðhaldsaðferðir í biðröð út frá þeirra sérstöku tilraunaþörfum.

Verkflæði í greiningu getur innihaldið eftirfarandi skref í tilgreindri röð:

1. Prime (viðhaldsflís)
2. scIC Hreyfifræði (frumur A, greiningarefni A, frumuflís)
3. Kerfisþvottur (viðhaldsflís)
4. scIC Hreyfifræði (frumur B, greiningarefni A, frumuflís)
5. Kerfisþvottur (viðhaldsflís)
6. Aðeins greiningarefnisstillt scIC Kinetics (greiningarefni A, Cyto flís)
   • Skref fyrir undirbúning og kerfisþvott eru framkvæmd á viðhaldsflögu. Kerfisþvottur er innifalinn þegar skipt er yfir í aðra frumulínu og áður en aðeins greiningarefnisprófið er framkvæmt í lok vinnuflæðisins.
   • Nánari upplýsingar er að finna í kaflanum um þvott á Cyto-kerfinu í aðalhandbókinni.
   • Þegar hvarfhraðaprófanir á frumum eru settar í biðröð skal hafa lífvænleika frumna í huga, sem er háð frumulínunni.
   • Fyrir viðkvæmar frumulínur er mælt með því að keyra aðeins 1-2 prófanir í hverju prófunarferli. Fyrir endingarbetri frumulínur er hægt að setja fleiri prófanir í biðröð.
   • ATH: Fyrir frekari prófanir skal útbúa frumulausn í aðskildum hettuglösum með því að gefa frumunum mismunandi nöfn.
   • Gangið úr skugga um að öll hvarfefni séu fersk og síuð í gegnum 0.22 µm síu. Að lokum skal setja tilbúin hvarfefni í tækið samkvæmt leiðbeiningum frá heliOS.
   • Hægt er að hefja keyrsluna með því að smella á bláu örina sem heitir „Keyra“ og fylgja skrefunum í ræsingarhjálpinni fyrir prófun.
   • Þegar keyrslan hefur hafist starfar tækið sjálfstætt þar til öllu prófunarferlinu er lokið.

Greining á scIC tilraunum

scIC greiningarvinnuflæði

• scIC gögn geta verið frábrugðin hefðbundnum líffræðilegum skynjaragögnum vegna náttúrulegrar flækjustigs atburða sem eiga sér stað í frumum sem teknar eru á yfirborði heliXcyto flísarinnar, sem getur leitt til óreglu í skynjaramyndum.
• Þess vegna er áhersla lögð á gæðaeftirlit fyrir myndir sem teknar eru við hvert mælingarskref og fyrir skynjaramyndir sem myndaðar eru á lendingarsíðu sjálfvirku greiningarinnar.
• Að auki býður heliOS upp á verkfæri til að taka á óreglum í skynjaragreiningum við handvirka gagnagreiningu scIC.

gagnagreiningarferli scIC:

1. Myndskoðun:
   • Skoðið allar myndir sem teknar voru við mælinguna (flipinn Myndir í tilraunaglugganum).
   • Hversu margar frumur héldust stöðugar í gildrunum allan tímann sem mælingin stóð yfir?
   • Hver er ástand frumnanna? Athugaðu nákvæmni og heilleika frumnanna.
   • Eru gildrurnar hreinar eftir endurnýjunarskrefið?
2. Athugun á hrágögnum:
   • Skoðið hrágögnin fyrir viðmiðunarpunkt 1 og mælipunkt 2
   • Merki staðlunartoppsins ætti að vera nálægt eða hærra en hæsta hrágagnamerkið.
   • Fer merkið aftur í grunnlínugildi á báðum stöðum eða eru vísbendingar um ósértæka bindingu?
3. Stöðluð gagnaprófun:
   • Eru innspýtingarstökkin fyrir blett 1 og blett 2 rétt yfirlagð?
4. Tilvísunargögn: Athugun
   • Færir endurnýjunarskrefið merkið aftur í grunnlínu? Ef ekki, athugið hvort frumur eða rusl séu í gildrunum eftir endurnýjun með því að endurnýjaviewað taka myndirnar.
   • Eru einhverjar toppar, útlægar vísbendingar eða aðrar óreglulegar niðurstöður í vísunarkúrfunum? Ef svo er, endurskoðaðu þáview myndirnar til að bera kennsl á hugsanlegar orsakir og íhuga handvirkar leiðréttingar.
5. Gagnasamræmisprófun:
   • Að framkvæma sjónrænt gæðamat
   • Lýsir aðlögunin nákvæmlega hegðun ferlanna, eða fer aðlögunarlínan yfir skynjaragrafið?
   • Lýsir aðlögunin rétt sveigju gagnanna?
   • Er ampEr liturinn í samræmi við vísað er til gagna?

Sjálfvirk gagnagreining scIC

• Sjálfvirka greiningin frá scIC vinnur úr hrágögnum í gæðaeftirlitsrit og aðlöguð gögn með örfáum smellum.
  1. Opnaðu scIC tilraun með því að tvísmella á valda tilraun í tilraunalistanum.
  2. Smelltu á stóra bláa Greina hnappinn neðst á tilraunaflipanum.
  3. Úr tilraunarvinnuflæðinu skaltu velja þá prófun sem þú vilt greina.
  4. Veldu Kinetics scIC úr tiltækum greiningartegundum og smelltu á Næsta.
     • ATH: Ef tilraunin er enn í gangi verða aðeins lokið próf sýnd á listanum. Þegar próf hefur verið valið birtast í næsta glugga allar tiltækar greiningartegundir sem eru sértækar fyrir aðferðina/prófið sem notað var.
  5. Ef þörf krefur, stillið greininguna í eftirfarandi glugga. Sjálfgefið aðlögunarlíkan er „Hreyfifræði – Frjálst endastig“ með gátreitnum „Þvinga aðlögunarlok á núll“ virkjaður. Víkið aðeins frá þessu líkani ef líffræði eða gögn krefjast flóknari lýsingar.
  6. Þegar stillingunni er lokið skal smella á Greina til að sjá allar afleiddar skyndimyndir, hráar og unnar skynjaramyndir og hvarfhraðagildi.
• Vegna eðlislægs flækjustigs sampÞar sem notaðar eru lesefni fyrir scIC prófanir, geta skynjarar sem myndast haft óreglulegar niðurstöður.
• Til að bregðast við þessu er áhersla lögð á gæðaeftirlit með myndum og skynjaramyndum í sjálfvirkri greiningu.
• Ef handvirkar leiðréttingar eða ítarlegri greiningar eru nauðsynlegar, þá eru verkfæri til að leiðrétta gripi í Scratchpad fyrir handvirka greiningu.

Viðhald og afmengun heliXcyto

• Viðhald heliXcyto er nauðsynlegt til að tryggja bestu mögulegu virkni og endingu tækisins. Reglulegt viðhald felur í sér þrif sem koma í veg fyrir mengun og viðhalda heilleika kerfisins, sem gerir kleift að fá nákvæmar niðurstöður og greiðan rekstur. Samræmd umhirða er mikilvæg fyrir áreiðanleika tækisins og gæði tilraunaniðurstaðna.
  Viðhald heliXcyto felur í sér tvær lykilaðgerðir: Cyto System Wash, sem hægt er að samþætta beint í greiningarvinnuflæði, og Clean & Sleep, sem er framkvæmt sem sérstök rútína til að viðhalda tækinu rétt fyrir notkun eftir fyrri lengri mælingu yfir nótt eða þegar það hefur ekki verið notað í meira en tvo daga.
• Bæði System Wash og Clean & Sleep krefjast þess að heliX® viðhaldsflögu sé til staðar í flögubakkanum.

Hreinlætis- og svefnrútína

• Hreinsun og svefnvenja er ætluð til þrifa og til að slökkva á/geyma tæki. Aðferðin skolar fyrst vökvaslöngur heliX® tækisins með útfjólubláu vatni og síðan með 70% etanóli. Að lokum eru allar slöngur loftaðar.
• Þessi hreinsunaraðferð er fullkomlega sjálfvirk og tekur um það bil 40 mínútur. Á meðan á aðgerðinni stendur er etanólinu dælt út í vatnsflöskuna, þannig að innihaldi flöskunnar ætti að farga á eftir.
• Eftir hreinsun og svefnstillingu fer tækið í svefnham og ekki er hægt að nota það fyrr en vekja og undirbúa hefur verið. HeliX® viðhaldsflögu er nauðsynleg fyrir báðar keyrslurnar.
• MIKILVÆGT: Til að koma í veg fyrir mengun rörsins skal farga innihaldi vatnsflöskunnar (vatns/etanólblöndu) og tæma úrgangsílátið eftir hreinsun.

Slökkvun og langtímageymsla

• Ef slönguna er ekki í notkun í lengri tíma skal fjarlægja flöskuna sem inniheldur vatnið og etanólið úr stuðpúðabakkanum eftir Clean & Sleep aðgerðina og láta slönguna vera í loftlausri stöðu.
• Fjarlægið einnig heliX® viðhaldsflísinn og geymið hann í upprunalegum umbúðum. Þetta kemur í veg fyrir bakflæði og mengun. Slökkvið á tækinu.

Þvottur á frumukerfinu

• heliXcyto System Wash hreinsar örflæðiskerfið ítarlega með hreinsiefni 3 (CS3) á um 45 mínútum. CS3 er tekið upp á tveimur sekúndum.tagFyrsta nálin og sampLykkjurnar eru fylltar og ræktaðar til að fjarlægja öll mengunarefni.
• ATH: Keyrðu Cyto System Wash að minnsta kosti daglega þegar tækið er í notkun. Við mælum með að bæta Cyto System Wash aðferðinni við prófunarvinnuflæði annaðhvort eftir hverja prófun (þegar skipt er yfir í nýja frumulínu eða ef ...amp(ef gæði eru ekki fullnægjandi) eða við lok greiningarvinnuflæðis. Skiptið um viðhaldsflögu eftir að hámarki 50 Cyto System Washes, sem sýndir eru sem endurnýjunartalning í flögubakkanum. view af tækjastýringunni.

Hafðu samband

• Dynamic Biosensors GmbH
• Perchtinger Str. 8/10
• 81379 München
• Þýskalandi
• Bruker Scientific LLC
• Manning Road 40, Manning Park
• Billerica, MA 01821

Bandaríkin

• Upplýsingar um pöntun order.biosensors@bruker.com
• Tæknileg aðstoð support.dbs@bruker.com
• www.dynamic-biosensors.com
• Hljóðfæri og flís eru hönnuð og framleidd í Þýskalandi.
• ©2025 Dynamic Biosensors GmbH
• Aðeins til rannsóknarnotkunar. Ekki til notkunar í klínískum greiningaraðgerðum.

Algengar spurningar

Algengar spurningar um scIC

Get ég endurnýtt heliXcyto flísina?

Já, heliXcyto örgjörvinn er endurnýtanlegur og einnota. Fylgið viðeigandi leiðbeiningum um þrif og geymslu.

Hver er tilgangur viðhaldsflísins?

Viðhaldsflísinn er notaður til að þrífa, prófa og viðhalda kerfinu til að tryggja rétta virkni.

Hversu oft ætti ég að þrífa tækið?

Vökvakerfi heliXcyto er haldið hreinu með Cyto System Wash og Clean&Sleep aðferðunum. Mælt er með að örvökvakerfið sé hreinsað með Cyto System Wash á viðhaldsflísi eftir hverja prófun (sérstaklega þegar skipt er um frumugerð) eða í síðasta lagi í lok prófunarvinnuflæðis. Clean&Sleep aðferðin á að nota rétt fyrir notkun eftir langa mælingu (t.d. að morgni eftir tilraun yfir nótt) eða þegar heliXcyto verður ekki í notkun í meira en tvo daga eftir að það hefur verið slökkt á.

Hversu lengi er hægt að geyma lausnirnar: RB 1 / vatn / CS 1 / CS 3 / eðlilegunarlausn í tækinu?

Almennt skal skoða allar lausnir fyrir hverja mælingu með tilliti til eftirstandandi rúmmáls og hugsanlegrar gruggunar eða úrkomu. Í slíkum tilfellum þarf að skipta um lausnina strax. Vatn og RB 1 skal skipta út daglega og sía RB 1 fyrir hverja mælingu. Þynnta eðlilegunarlausn má nota í 2 daga í röð. Hreinsilausnir eru stöðugar í um það bil 3 daga.

Hversu lengi get ég notað heliXcyto örgjörvann?

Hægt er að athuga gildistíma heliXcyto örgjörvans í flipanum „Flísbakki“ í hlutanum „Tæki“ í heliOS. Engin trygging er veitt fyrir heilleika örgjörvans eftir gildistíma. Engu að síður, svo lengi sem gildrurnar eru stöðugar, yfirborðið er hreint og flúrljómunarbakgrunnurinn er undir viðmiðunarmörkunum sem gefnar eru upp í örgjörvaprófinu, er örgjörvinn talinn nothæfur til mælinga. Mælt er með reglulegri ytri hreinsun örgjörvans (flísahreinsunarsett CCK-1-1) eftir notkun örgjörvans til að lengja líftíma örgjörvans verulega.

Hversu lengi get ég notað viðhaldsflísinn?

Viðhaldsflísinn þarf að skipta út eftir 50 kerfisþvotta (talið sem endurnýjanir í flísabakkaflipanum í tækjastýringunni í heliOS).

Hversu oft ætti að framkvæma heliXcyto örgjörvaprófið?

Flísaprófið safnar upplýsingum um flúrljómunarbakgrunn, hreinleika og heilleika flísarinnar áður en ný tilraun er hafin. Það skal framkvæmt að minnsta kosti einu sinni þegar ný flís er notuð, en mælt er með því að það sé framkvæmt fyrir eða í upphafi hverrar tilraunar til að athuga stöðu flísarinnar. Þetta gerir kleift að aðlaga mælingaraðstæður og rekja frávik í skynjaramyndunum til flísarinnar eða tækisins.

Hver er efnafræði merkingar greiningarefna?

Rautt eða grænt flúrljómandi litarefni er tengt með merkingarbúnaði okkar í gegnum NHS-estera við frum-amín í próteingreiningarefnum (t.d. lýsín eða N-enda). Nánari upplýsingar og kafla um bilanaleit er að finna í handbókum okkar fyrir heliXcyto merkingarbúnaðinn, rauðan litarefni (merkingarbúnaðinn, rauður litarefni 2, CY-LK-R2-1) og heliXcyto merkingarbúnaðinn, grænan litarefni (merkingarbúnaðinn, grænn litarefni CY-LK-G1-1). webbúð.

Hvar er hægt að finna upplýsingar um heliOS innskráningar og leyfi?

Ferlið við að slá inn innskráningarupplýsingar og leyfisupplýsingar er lýst í uppsetningarhlutanum fyrir heliOS í heliXcyto handbókinni frá okkar. websíða (leiðbeiningar fyrir heliXcyto). Leyfisupplýsingar þínar ættu að vera vistaðar í scIC möppunni á heliXcyto tölvuskjáborðinu, sem forritasérfræðingur okkar bjó til á námskeiðinu.

Hver eru örvunar-/útgeislunarsvið heliXcyto?

Örvun í rauðu er 605-625 nm, útgeislun (skynjun) er 655-685 nm. Örvun í grænu er 490-510 nm, útgeislun í grænu er 525-575 nm.

Hversu oft þarf ég að mæla sömu tilraunina til að tryggja tölfræðilega áreiðanleika?

Til að ná áreiðanlegum meðalhraða er mælt með því að framkvæma 3-4 endurtekningar á 3-styrks hraðamælingum í einsleitum frumuhópi. Í samræmdu gagnasafni ættu tengsla- og sundrunartíðni endurtekinna prófana að vera innan 2-4 tíma glugga.

Hver er næmi scIC mælinga?

Neðri greiningarmörk hvað varðar marktjáningu eru háð merkingu greiningarefnisins, en venjulega getur scIC þegar mælt hvarfhraða á aðeins 1000-10000 sameindum í hverri frumu. Til að auka næmi er mælt með því að fanga að minnsta kosti 5 frumur og jafna skal greiningarefnis-DOL á 5-10 og LED-afl til að ná hámarks flúrljómunartölum.

Hver eru greiningarmörk heliXcyto hvað varðar hvarfhraða?

Vinsamlegast skoðið tæknilegar upplýsingar um heliXcyto fyrir nýjustu tæknilegu mörkin, sem er að finna í heliXcyto handbókinni (heliXcyto handbók). Sundrunarstuðull Kd: 10 pM til 1 mM Tengihraðastuðull kon: 1E3 til 1E7 M-1s-1 Sundrunarhraðastuðull koff: 1E-6 til 1 s-1 Fyrir nánari upplýsingar, vinsamlegast skoðið heliXcyto handbókina okkar. websíða.

Skjöl / auðlindir

kraftmiklir BIOSENSORS heliX cyto fullkomlega sjálfvirkir rannsóknarstofugreiningarkerfi [pdfNotendahandbók heliX cyto fullkomlega sjálfvirkt greiningarkerfi fyrir rannsóknarstofu, heliX cyto, fullkomlega sjálfvirkt greiningarkerfi fyrir rannsóknarstofu, sjálfvirkt greiningarkerfi fyrir rannsóknarstofu, greiningarkerfi fyrir rannsóknarstofu, greiningarkerfi, kerfi

Heimildir

• Notendahandbók