Istruzioni InBios SCoV-2 Rileva IgM ELISA
InBios SCoV-2 Rileva IgM ELISA

AVVERTENZE E PRECAUZIONI

  • Per uso diagnostico in vitro solo in base all'autorizzazione all'uso di emergenza (EUA). Una conoscenza approfondita di questo foglietto illustrativo è necessaria per un uso corretto del prodotto. Risultati affidabili si ottengono solo utilizzando precise tecniche di laboratorio e seguendo accuratamente il foglietto illustrativo.
  • Questo test non è stato approvato o approvato dalla FDA, ma è stato autorizzato per l'uso di emergenza dalla FDA ai sensi di un EUA per l'uso da parte di laboratori autorizzati.
  • Questo test è stato autorizzato solo per rilevare gli anticorpi IgM contro SARS-CoV-2, non per altri virus o agenti patogeni.
  • Questo uso di emergenza di questo test è autorizzato solo per la durata della dichiarazione che sussistono circostanze che giustificano l'autorizzazione dell'uso di emergenza della diagnostica in vitro per il rilevamento e/o la diagnosi di COVID-19 ai sensi dell'articolo 564(b)(1) del Federal Food, Drug and Cosmetic Act, 21 USC § 360bbb-3(b)(1), a meno che la dichiarazione non venga annullata o l'autorizzazione venga revocata prima.
  • I laboratori negli Stati Uniti e nei suoi territori sono tenuti a riferire tutti i risultati alle autorità sanitarie pubbliche competenti.
  • Segui le precauzioni standard. Tutti i campioni dei pazienti e i controlli positivi devono essere considerati potenzialmente infetti e maneggiati secondo una buona procedura di laboratorio.

MISURE DI SICUREZZA

  • Tutti i materiali di origine umana utilizzati nella preparazione del controllo negativo sono risultati negativi per gli anticorpi contro l'antigene di superficie dell'HIV 1 e 2, dell'epatite C e dell'epatite B. Tuttavia, nessun metodo di prova può garantire un'efficienza del 100%. Pertanto, tutti i controlli umani e l'antigene devono essere maneggiati come materiale potenzialmente infettivo. I Centers for Disease Control and Prevention e il National Institutes of Health raccomandano che gli agenti potenzialmente infettivi siano gestiti al livello di biosicurezza 2.
  • Smaltire materiali pericolosi o biologicamente contaminati secondo le pratiche del proprio istituto. Eliminare tutti i materiali in modo sicuro e accettabile e in conformità con i requisiti normativi vigenti.
  • Indossare indumenti protettivi, protezione per gli occhi e guanti monouso durante l'esecuzione del test. Lavarsi accuratamente le mani in seguito.
  • Non mangiare, bere, fumare o applicare cosmetici nel laboratorio in cui vengono maneggiati i materiali immunodiagnostici.
  • Non pipettare con la bocca.

PRECAUZIONI TECNICHE

  • Questo test deve essere eseguito solo su siero o plasma umano (EDTA dipotassico). L'uso di sangue intero, plasma con altri anticoagulanti o altre matrici di campioni non è stato convalidato.
  • Non mescolare vari lotti di qualsiasi componente del kit all'interno di un singolo dosaggio.
  • Tutti i reagenti devono essere portati a temperatura ambiente (20-25°C) prima di iniziare il test. Il test sarà influenzato dalle variazioni di temperatura.
  • Evitare il congelamento e lo scongelamento ripetuti dei campioni di siero o plasma da valutare.
  • Dispensare i reagenti direttamente dai flaconi utilizzando puntali per pipette puliti. Il trasferimento dei reagenti può causare contaminazione.
  • I pozzetti per microtitolazione inutilizzati devono essere richiusi immediatamente nella busta di alluminio con chiusura lampo con l'essiccante fornito. La mancata osservanza di questa precauzione può causare risultati errati con quei micropozzetti inutilizzati.
  • Non utilizzare alcun componente oltre la data di scadenza indicata sull'etichetta.
  • Evitare l'esposizione dei reagenti a calore eccessivo o luce solare diretta durante la conservazione e l'incubazione.
  • Alcuni reagenti possono formare un leggero precipitato, mescolare delicatamente prima dell'uso.
  • Il lavaggio incompleto influirà negativamente sul risultato e sulle prestazioni del test.
  • Per ridurre al minimo la potenziale deriva del test dovuta alla variazione del tempo di incubazione del substrato, occorre prestare attenzione ad aggiungere la soluzione di arresto nei pozzetti nello stesso ordine e velocità utilizzati per aggiungere la soluzione di TMB.
  • Evitare la contaminazione microbica dei reagenti.
  • Evitare la contaminazione della soluzione di substrato TMB con la soluzione di coniugato. La soluzione di substrato TMB deve essere di colore chiaro; un cambiamento di colore blu prima dell'uso può indicare che si è verificata una contaminazione.
  • Utilizzare un puntale monouso pulito per ogni reagente, standard, controllo o campione.
  • Coprire l'area di lavoro con carta assorbente monouso.

ATTENZIONE: POTENZIALE MATERIALE BIOLOGICO

Questo kit contiene reagenti a base di siero o plasma umano. Il siero o plasma utilizzato è stato inattivato termicamente se non diversamente indicato. Maneggiare tutti i sieri, plasma e kit utilizzati come se contenessero agenti infettivi. Osservare le precauzioni stabilite contro i rischi microbiologici durante l'esecuzione di tutte le procedure e seguire le procedure standard per il corretto smaltimento dei campioni.

PERICOLO CHIMICO

Le schede di sicurezza (SDS) sono disponibili per tutti i componenti di questo kit. Rifview tutte le SDS appropriate prima di eseguire questo test. Evitare qualsiasi contatto tra le mani e gli occhi o le mucose durante il test. In caso di contatto, consultare la SDS applicabile per un trattamento appropriato.

USO PREVISTO

SCoV-2 Detect™ IgM ELISA è un test diagnostico in vitro per la rilevazione qualitativa degli anticorpi IgM contro SARS-CoV-2 nel siero e plasma umani (EDTA dipotassico).

SCoV-2 Detect™ IgM ELISA è destinato all'uso come ausilio nell'identificazione di individui con una risposta immunitaria adattativa a SARS-CoV-2, indicando un'infezione recente o precedente. Al momento, non è noto per quanto tempo gli anticorpi persistono dopo l'infezione e se la presenza di anticorpi conferisca un'immunità protettiva. L'ELISA SCoV-2 Detect™ IgM non deve essere utilizzato per diagnosticare o escludere un'infezione acuta da SARS‑CoV‑2.

I test sono limitati ai laboratori certificati ai sensi dei Clinical Laboratory Improvement Amendments of 1988 (CLIA), 42 USC §263a, che soddisfano i requisiti per eseguire test di alta complessità.

I risultati sono per il rilevamento degli anticorpi IgM SARS-CoV-2. Gli anticorpi IgM contro SARS-CoV-2 sono generalmente rilevabili nel sangue diversi giorni dopo l'infezione iniziale, sebbene la durata della presenza degli anticorpi dopo l'infezione non sia ben caratterizzata. Gli individui possono avere virus rilevabile presente per diverse settimane dopo la sieroconversione.

I laboratori negli Stati Uniti e nei suoi territori sono tenuti a riferire tutti i risultati alle autorità sanitarie pubbliche competenti.

Sample le dovrebbero essere testate solo da individui che sono da 7 giorni a 64 giorni dopo l'esordio dei sintomi. Anticorpo SARS-CoV-2 negativo sampLe raccolte di 7 giorni o più dopo l'insorgenza dei sintomi devono essere riflesse su un test che rileva e segnala SARS-CoV-2 IgG.

La sensibilità di SCoV-2 Detect™ IgM ELISA subito dopo l'infezione è sconosciuta. I risultati negativi non precludono l'infezione acuta da SARS-CoV-2. Se si sospetta un'infezione acuta, è necessario un test diretto per SARS-CoV-2.

Possono verificarsi risultati falsi positivi per SCoV-2 Detect™ IgM ELISA a causa della reattività crociata da anticorpi preesistenti o altre possibili cause.

SCoV-2 Detect™ IgM ELISA può essere utilizzato solo nell'ambito dell'autorizzazione all'uso di emergenza (EUA) della Food and Drug Administration.

SOMMARIO E SPIEGAZIONE DEL TEST

Il nuovo coronavirus, SARS-CoV-2 (l'agente eziologico di COVID-19), è stato responsabile della pandemia di sintomi simili alla polmonite e decessi associati dalla fine del 2019 al 2020. Il rilevamento dell'epidemia iniziale nella provincia di Hubei della Cina e la conseguente necessità di una diagnosi efficace sono state rapidamente descritte (Li et al., 2020; Wu et al., 2020; Zhou et al., 2020).

È stato riportato che il paziente positivo per SARS-CoV2 confermato dalla PCR può sieroconvertire e sviluppare anticorpi contro gli antigeni SARS-CoV-2 ovunque da 6 a 21 giorni dopo l'insorgenza dei sintomi clinici (Okba et al., 2020). Il rilevamento specifico e affidabile degli anticorpi IgM umani contro SARS-CoV-2 può fornire un'indicazione di infezione recente.

SCoV-2 Detect™ IgM ELISA è un test immunologico qualitativo per il rilevamento di anticorpi IgM diretti agli antigeni correlati a SCoV-2.

PRINCIPIO DEL TEST

SCoV-2 Detect™ IgM ELISA è un ELISA indiretto qualitativo per il rilevamento di anticorpi IgM che prendono di mira gli epitopi derivati ​​da SARS-CoV-2. I campioni di siero o plasma diluiti vengono aggiunti a pozzetti rivestiti di antigene e incubati. Dopo l'incubazione e il lavaggio, gli anticorpi umani che prendono di mira gli antigeni SARSCoV-2 rimangono legati alla superficie della piastra. L'anticorpo secondario coniugato alla perossidasi di rafano (HRP) mirato alle IgM umane viene quindi aggiunto a ciascun pozzetto. Dopo l'incubazione, i pozzetti ELISA vengono nuovamente lavati prima di aggiungere un substrato di tetrametilbenzidina (TMB). Una soluzione di arresto acida viene infine utilizzata per fermare la reazione e il grado di turnover enzimatico del substrato viene determinato mediante misurazione dell'assorbanza a 450 nanometri. I controlli positivo, negativo e cut-off sono forniti per garantire l'integrità del test e per determinare la soglia specifica del test. È possibile valutare fino a 90 campioni con ciascun kit (poiché i controlli vengono eseguiti in duplicato). L'intera procedura dura circa 1 ora e 50 minuti.

CONTENUTO DEL KIT

Attenzione: Non utilizzare reagenti dove si sono verificati danni alla confezione.

Il kit contiene i seguenti reagenti:

  1. SCOV-2 STRISCE DI MICROTITAZIONE RIVESTITE CON ANTIGENE PER IGM
    Portastrisce in un sacchetto di alluminio richiudibile, contenente 96 pozzetti per microtitolazione in polistirene rivestiti con antigene SCoV-2 in ciascun pozzetto. Stabile a 2-8°C fino alla data di scadenza.
  2. SCOV-2 IGM CONTROLLO NEGATIVO
    Una fiala, 50 µl. Siero negativo. Il controllo negativo aiuterà a monitorare l'integrità del kit. Stabile a 2-8°C fino alla data di scadenza.
  3. SCOV-2 IGM CONTROLLO POSITIVO
    Una fiala, 50 µl. Controllo positivo sample. Il controllo positivo aiuterà a monitorare l'integrità del kit. Stabile a 2-8°C fino alla data di scadenza.
  4. CONTROLLO CUT-OFF IGM SCOV-2
    Una fiala, 50 µl. Controllo di interruzione sample. Il controllo cut-off aiuterà a monitorare l'integrità del kit ea stimare la soglia corretta per determinare i testamplo stato. Stabile a 2-8°C fino alla data di scadenza.
  5. SAMPLE DILUIZIONE TAMPONE PER SCOV-2
    Due flaconi da 25 ml ciascuno, pronti per l'uso. Soluzione tamponata con Tris-HCl (pH 7.2-7.6) con Tween 20 (0.05%), conservante (0.05% ProClin-300) e additivi. L'Sample Dilution Buffer sarà utilizzato per la diluizione del test sample e controlli. Stabile a 2-8°C fino alla data di scadenza.
  6. 100XCONIUGATO PER SCOV-2 IGM
    Una fiala, 100 µl, contenente un anticorpo marcato con perossidasi di rafano in un tampone a base di Tris con 0.03% – 0.05% di ProClin-300. Stabile a 2-8°C fino alla data di scadenza.
  7. DILUENTE CONIUGATO PER SCOV-2
    Una bottiglia, 9 ml. Questo contiene la soluzione diluente per il coniugato 100X in un tampone a base di Tris con lo 0.01% di Thimerosal come conservante. Il coniugato 100X viene diluito direttamente in questa soluzione. Il coniugato 100X deve essere diluito in questa soluzione solo immediatamente prima di eseguire il test. Il coniugato diluito non utilizzato deve essere eliminato. Il diluente del coniugato è stabile a 2-8°C fino alla data di scadenza.
  8. TAMPONE DI LAVAGGIO 10X
    Una bottiglia, 120 ml. Soluzione fisiologica tamponata con fosfato concentrato 10 volte con Tween 20 (pH 6.8-7.0). Stabile a 2-8°C fino alla data di scadenza.
  9. SUBSTRATO TMB LIQUIDO
    Un flacone, 12 ml, pronto all'uso. Contiene 3, 3', 5, 5'-tetrametilbenzidina (TMB) e acqua ossigenata in un tampone acido citrico-citrato (pH 3.3- 3.8). Stabile a 2-8°C fino alla data di scadenza.
    Nota: Il substrato deve essere sempre conservato nella bottiglia protetta dalla luce fornita.
  10. FERMARE LA SOLUZIONE
    Un flacone, 6 ml, pronto per l'uso. acido solforico 1N. Usato per fermare la reazione. Stabile a 2-8°C fino alla data di scadenza.

Attenzione: Acido forte. Indossare guanti protettivi, mascherina e occhiali di sicurezza. Smaltire tutti i materiali secondo tutte le norme e i regolamenti di sicurezza applicabili.

MATERIALI E ATTREZZATURE NECESSARI MA NON FORNITI

  • Spettrofotometro ELISA in grado di misurare l'assorbanza a 450 nm
  • Acqua biologica o di alta qualità
  • Becher e ancorette di dimensioni adeguate
  • Pompa a vuoto
  • Lavapiatti automatica
  • Incubatrice a 37°C senza alimentazione di CO2
  • Pipettatori monocanale da 1-10 µl, pipettatori monocanale e multicanale da 50-200 µl
  • Provette in polipropilene o piastre di diluizione a 96 pozzetti
  • Parafilm o copertura in lamiera di plastica
  • Timer
  • Vortice

RACCOLTA E PREPARAZIONE DEI CAMPIONI

  • Per questo test devono essere utilizzati solo siero o plasma umani (EDTA dipotassico) e devono essere osservate le consuete precauzioni per la puntura venosa.
  • Per ottenere il siero, il sangue ottenuto mediante prelievo venoso senza anticoagulante deve essere lasciato coagulare a temperatura ambiente (20-25°C) per 30-60 minuti e quindi centrifugato secondo il Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI Approved Guideline – Procedures for the Handling e elaborazione di campioni di sangue per comuni test di laboratorio; GP44).
  • Il test deve essere eseguito il prima possibile dopo la raccolta. Non lasciare sieri o plasma a temperatura ambiente per periodi prolungati. Il siero o il plasma separati devono rimanere a 20-25°C per non più di 8 ore. Se le analisi non vengono completate entro 8 ore, sample le devono essere refrigerate a 2-8°C. Se i test non vengono completati entro 48 ore, o se il siero o il plasma separato deve essere conservato oltre le 48 ore, il siero o il plasma devono essere congelati a una temperatura pari o inferiore a -20°C.
  • Evitare il congelamento e lo scongelamento ripetuti di sampmeno in quanto ciò può causare il deterioramento dell'analita. I congelatori antigelo non sono adatti per samplo stoccaggio.
  • Congelati sample le devono essere scongelate a temperatura ambiente e mescolate accuratamente agitando delicatamente o capovolgendole prima dell'uso. Centrifuga sempre veloce prima dell'uso.
  • Se devono essere spediti sieri o plasma, devono essere imballati in conformità con i regolamenti federali sul trasporto di agenti infettivi.
  • Non utilizzare sieri o plasma se si osservano segni di crescita microbica.

PROCEDURA DI PROVA

ATTENZIONE: La procedura di prova deve essere rigorosamente seguita. Eventuali deviazioni dalla procedura possono produrre risultati errati. Portare tutti i reagenti ei campioni a temperatura ambiente (~25°C) prima dell'uso. Mescolare accuratamente i reagenti e sampmeno prima dell'uso capovolgendo delicatamente. NOTA: Per la conservazione a lungo termine, siero o plasma sampi le non devono essere scongelati e congelati ripetutamente più di quattro volte. Sample le devono essere ulteriormente suddivise in piccole aliquote e conservate a -20°C o meno.

Questo test deve essere eseguito manualmente. Il lavaggio delle lastre deve essere eseguito utilizzando un lavapiastre automatizzato opportunamente calibrato. Questo kit non è stato ottimizzato da InBios per l'uso con uno specifico sistema di elaborazione ELISA automatizzato. L'uso con un sistema di elaborazione ELISA automatizzato richiede un'adeguata convalida per garantire che i risultati siano equivalenti alle aspettative descritte in questo foglietto illustrativo.

Preparazione dei reagenti

  • Preparazione del tampone di lavaggio 1X
    Diluire il tampone di lavaggio 10X a 1X utilizzando acqua biologica o di alta qualità. Per preparare una soluzione di tampone di lavaggio 1X, mescolare 120 ml di tampone di lavaggio 10X con 1080 ml di acqua distillata (o deionizzata). Mescolare accuratamente per garantire che l'eventuale precipitato sia disciolto e che la soluzione sia uniforme. Una volta diluita a 1X, la soluzione può essere conservata a temperatura ambiente per un massimo di 6 mesi. Etichettare correttamente la soluzione tampone di lavaggio 1X e annotare attentamente la data di scadenza sull'etichetta. Controllare la contaminazione prima dell'uso. Eliminare se si sospetta la contaminazione.
  • Pozzetti per strisce di microtitolazione
    Selezionare il numero di pozzetti rivestiti richiesti per il test. I restanti pozzetti non utilizzati devono essere riconfezionati immediatamente con l'essiccante fornito e conservati a 2-8°C fino al momento dell'uso o alla scadenza.
  • Preparazione della soluzione coniugata
    Aggiungere 90 µ l di coniugato 100X per SCoV-2 IgM direttamente al flacone da 9 ml di diluente coniugato per SCoV-2 (1 parte: 100 parti). In alternativa, utilizzare una pipetta pulita per rimuovere il volume richiesto di diluente del coniugato e aggiungere il volume necessario di 100XConjugate per SCoV-2ELISA in una provetta in polipropilene pulita per mantenere il rapporto 1:100. Mescolare capovolgendo più volte la soluzione. Questa soluzione coniugata deve essere preparata immediatamente prima di eseguire il test ed eliminata immediatamente dopo l'uso nel test.

Procedura di analisi

  1. I controlli positivi, negativi e di cut-off devono essere analizzati in duplicato (e analizzati su ogni piastra, ogni volta che viene eseguito un test). Siero/plasma sconosciuto sampi le possono essere testati in singolo o in duplicato. Siero o plasma sconosciuto sampi le testati in singolo possono richiedere un nuovo test come indicato nella sezione Interpretazione dei risultati. È possibile testare fino a novanta provini in singolo con un'intera piastra. Ricollocare immediatamente tutti i pozzetti della piastra ELISA non utilizzati nella confezione originale di alluminio con l'essiccante fornito, sigillare adeguatamente e conservare a 2-8°C.
  2. Diluire ogni controllo e ogni campione di prova 1:100 aggiungendo 4 µL di sample a 396 µl di Sample Tampone di diluizione per SCoV-2. Diluire samples in un dedicato sample blocco di diluizione o una provetta di dimensioni adeguate.
  3. Aggiungere 50 µl dei controlli diluiti 1:100 e dei campioni del test nelle posizioni appropriate della piastra per strisce di microtitolazione con rivestimento di antigene SCoV-2 (piastra ELISA). Annotare e registrare le posizioni di tutti i controlli e testample nei pozzetti della piastra ELISA.
  4. Coprire la parte superiore del piatto con parafilm (o un copripiatto di plastica) e rimuovere l'eventuale parafilm in eccesso dai bordi del piatto.
    Nota: Questo per assicurarsi che la distribuzione della temperatura sia distribuita uniformemente in tutti i pozzetti dal fondo e dai lati; qualsiasi parafilm in più può essere tagliato una volta che la parte superiore è sigillata per bloccare l'evaporazione.
    Procedura di analisi
    Procedura di analisi
    METODO CORRETTO
    Nota: Non impilare i piatti uno sopra l'altro. Dovrebbero essere stesi come un unico strato. Questo è molto importante per una distribuzione uniforme della temperatura. Non utilizzare CO2 o altri gas. Non mettere i piatti a contatto con sostanze bagnate come asciugamani di carta bagnati, ecc.
  5. Coprire la piastra con parafilm o un copripiatto di plastica e incubare le piastre a 37°C per 1 ora in un'incubatrice.
  6. Dopo l'incubazione, lavare la piastra 6 volte con un lavapiastre automatico utilizzando 1X Wash Buffer. Utilizzare 300 µ l per pozzetto in ogni ciclo di lavaggio.
  7. Preparare la soluzione di coniugato (90 µl di coniugato 100X: 9 mL di diluente di coniugato) e aggiungere 50 µl per pozzetto di questa soluzione di coniugato in tutti i pozzetti utilizzando un pipettatore multicanale. Scartare la restante soluzione di coniugato.
  8. Coprire la piastra con parafilm o una copertura per piastra di plastica e incubare la piastra(e) a 37°C per 30 minuti in un'incubatrice.
  9. Dopo l'incubazione, lavare la piastra 6 volte con il lavapiastre automatico utilizzando 1X Wash Buffer.
  10. Aggiungere 75 µ l per pozzetto di substrato Liquid TMB in tutti i pozzetti utilizzando un pipettatore multicanale.
  11. Incubare la piastra, scoperta a temperatura ambiente al buio, per 20 minuti.
  12. Aggiungere 50 µl per pozzetto di Stop Solution in tutti i pozzetti appropriati utilizzando un pipettatore multicanale. Assicurati di aggiungere StopSolution nello stesso ordine e approssimativamente alla stessa velocità con cui è stato applicato il TMB. (Nota: poiché il substrato TMB produce una reazione enzimatica con il coniugato HRP, è fondamentale che questo punto temporale di incubazione venga seguito il più fedelmente possibile). Lasciare riposare il piatto, scoperto a temperatura ambiente, per 1 minuto.
  13. Leggere la densità ottica a 450 nm (OD450) con un lettore di micropiastre. NON UTILIZZARE UNA LUNGHEZZA D'ONDA DI RIFERIMENTO. NON SOTTRARE O NORMALIZZARE ALCUN VALORE BIANCO O POZZI.
  14. Registrare il grezzo OD450 e valutare il sample status come indicato nelle sezioni Controllo di qualità e Interpretazione dei risultati.

CONTROLLO QUALITA '

Ogni kit contiene controlli positivi, negativi e cut-off. I controlli negativo e positivo hanno lo scopo di monitorare il fallimento sostanziale del reagente. Il test non è valido e deve essere ripetuto se il controllo sampi le non soddisfano le specifiche. Se il test non è valido, i risultati non possono essere utilizzati. I requisiti del controllo qualità (QC) devono essere eseguiti in conformità alle normative locali, statali e/o federali o ai requisiti di accreditamento e alle procedure standard di controllo qualità del laboratorio. Si raccomanda all'utente di fare riferimento a CLSI C24 e 42 CFR 493.1256 per indicazioni sulle pratiche di controllo qualità appropriate. I risultati di seguito sono forniti esclusivamente a scopo indicativo e applicabili solo alle letture spettrofotometriche.

Innanzitutto, calcolare i valori OD450 grezzi di controllo negativi, positivi e di cut-off medi (medi) come mostrato nell'esempio seguenteamples.

Example 1: Controllo negativo SCoV-2

OD450

  • Replicare: 1/0.145
  • Replicare: 2/0.133
  • Somma: 0.278

Controllo negativo medio = 0.278 ÷ 2 = 0.139

Example 2: Controllo positivo SCoV-2

  • Replicare: 1/1.876
  • Replicare: 2/1.685
  • Somma: 3.561

Controllo positivo medio = 3.561 ÷ 2 = 1.7805

Example 3: Controllo interruzione SCoV-2

  • Replicare: 1/0.645
  • Replicare: 2/0.571
  • Somma: 1.216

Controllo interruzione media = 1.216 ÷ 2 = 0.608

Infine, verificare che i requisiti del controllo qualità, elencati nella tabella seguente, siano soddisfatti.

Requisiti del controllo di qualità

Controllo

Requisito
Controllo positivo

DE ≥ 0.85

Controllo negativo

DO < 0.25
Controllo di interruzione

OD > Controllo Negativo OD

Sommario: I risultati della tabella sopra devono essere ottenuti affinché il test sia considerato valido. Il mancato rispetto di questi criteri è indice di deterioramento dei reagenti o di un errore nella procedura del test e il test deve essere ripetuto.

INTERPRETAZIONE DEI RISULTATI

Il valore di cut-off del test è stato determinato mediante lo screening di un numero elevato (>100) di siero umano normale (NHS) sample raccolte prima dell'epidemia di COVID-19 (~novembre 2019). La selezione del cut-off è stata eseguita stimando la media dei campioni negativi più tre (3) deviazioni standard.

Lo stato dell'ignoto sample è determinato calcolando prima il cut-off del test (mostrato sopra in Esample 3), seguito dal calcolo del rapporto tra la densità ottica (OD450) divisa per il cut-off.

Calcola il rapporto dello stato immunologico (ISR): Il rapporto dello stato immunologico (ISR) è calcolato dal rapporto della densità ottica (OD) ottenuta con il test sample diviso per il valore di cut-off calcolato. Calcolare il PVR per ogni prova sample. Se sconosciuto sampi le sono stati testati in duplicato, quindi calcolare la densità ottica media (OD450) prima di dividere per cut-off per determinare l'ISR.

Example 4: Calcolare il PVR per un Sample

Sample ID

Grezzo OD450
Sconosciutoample #1

0.952

Valore ISR = Raw OD ÷ Valore Cut-Off
Valore ISR = 0.952 ÷ 0.608 = 1.566

Valore ISR

risultati

Interpretazione

0.9 < PVR < 1.1 retest Se testati in singolo, quelli sampi le con valori OD prossimi al cut-off (0.9 < ISR < 1.1) devono essere ripetuti in duplicato insieme ai controlli per verificare la samplo stato. Se il valore ISR medio del test ripetuto in duplicato è ≥ 1, sample è considerato positivo per gli anticorpi IgM contro SCoV-2. Se il valore ISR medio del test duplicato è < 1, la sample è considerato negativo per gli anticorpi IgM diretti a SCoV-2.
≥ 1.1 Positivo Presenza di anticorpi IgM rilevabili contro l'antigene SCoV-2.
≤ 0.9 Negativo Non sono stati trovati anticorpi IgM rilevabili diretti all'antigene SCoV-2. Il risultato non esclude la possibilità di infezione da SARS-CoV-2.

LIMITAZIONI

  • Le caratteristiche delle prestazioni del test non sono state stabilite per la determinazione del risultato visivo.
  • Sample le dovrebbero essere testate solo da individui che sono da 7 giorni a 64 giorni dopo l'esordio dei sintomi. Anticorpo SARS-CoV2 negativo sampLe raccolte di 7 giorni o più dopo l'insorgenza dei sintomi devono essere riflesse su un test che rileva e segnala SARS-CoV-2 IgG.
  • Le caratteristiche delle prestazioni del test non sono state stabilite per matrici diverse dal siero o dal plasma EDTA dipotassico.
  • Il test non deve essere utilizzato per diagnosticare o escludere un'infezione acuta. I risultati non devono essere utilizzati come unica base per le decisioni sulla gestione del paziente.
  • Un risultato positivo potrebbe non indicare una precedente infezione da SARS-CoV-2. Considerare altre informazioni, inclusa la storia clinica e la prevalenza della malattia locale, nel valutare la necessità di un secondo test sierologico, ma diverso, per confermare una risposta immunitaria.
  • Un risultato negativo per un singolo soggetto indica l'assenza di anticorpi anti-SARS-CoV-2 rilevabili. I risultati negativi non precludono l'infezione da SARS-CoV-2 e non devono essere utilizzati come unica base per le decisioni sulla gestione del paziente. Un risultato negativo può verificarsi se la quantità di anticorpi anti SARS-CoV-2 presenti nel campione è inferiore al limite di rilevabilità del test, o se gli anticorpi rilevati non sono presenti durante la stage di malattia in cui comeample viene raccolto.
  • Al momento non è noto se la presenza di anticorpi contro SARS-CoV-2 conferisca immunità alla reinfezione.
  • Possono verificarsi risultati falsi positivi a causa della reattività crociata con anticorpi ad altri coronavirus.
  • Le caratteristiche delle prestazioni del test non sono state stabilite per il test del sangue del cordone ombelicale, per il test dei neonati, per lo screening prenatale.
  • Sampi le che sono emolizzati dovrebbero essere evitati per l'analisi con questo test.
  • I risultati di pazienti immunosoppressi devono essere interpretati con cautela.
  • I risultati del test devono essere interpretati solo nel contesto di altri risultati di laboratorio e dello stato clinico totale del paziente.
  • Le prestazioni di questo dispositivo non sono state stabilite in soggetti che hanno ricevuto un vaccino COVID-19. Il significato clinico di un risultato anticorpale positivo o negativo dopo la vaccinazione COVID-19 non è stato stabilito e il risultato di questo test non deve essere interpretato come un'indicazione o un grado di protezione dall'infezione dopo la vaccinazione.
  • Le prestazioni di questo test sono state stabilite sulla base della valutazione di un numero limitato di campioni clinici raccolti tra febbraio 2020 e giugno 2020 da più sedi negli Stati Uniti. La performance clinica non è stata stabilita in tutte le varianti circolanti, ma si prevede che rifletta le varianti prevalenti in circolazione al momento e al luogo della valutazione clinica. Le prestazioni al momento del test possono variare a seconda delle varianti in circolazione, compresi i nuovi ceppi emergenti di SARS-CoV-2 e la loro prevalenza, che cambia nel tempo.

CONDIZIONI DI AUTORIZZAZIONE PER IL LABORATORIO

La lettera di autorizzazione ELISA SCoV-2 Detect™ IgM, insieme alla scheda informativa autorizzata per gli operatori sanitari, alla scheda informativa autorizzata per i pazienti e all'etichettatura autorizzata sono disponibili presso la FDA websito: https://www.fda.gov/medical-devices/coronavirus-disease-2019-covid-19-emergency-use-authorizationsmedical-devices/vitro-diagnostics-euas

I laboratori autorizzati che utilizzano SCoV-2 Detect™ IgM ELISA devono rispettare le Condizioni di autorizzazione indicate nella Lettera di autorizzazione come di seguito elencate:

  • I laboratori autorizzatia che utilizzano SCoV-2 Detect™ IgM ELISA devono includere nei rapporti sui risultati dei test, tutte le schede informative autorizzate. In circostanze urgenti, possono essere utilizzati altri metodi appropriati per la diffusione di queste schede informative, che possono includere i mass media.
  • I laboratori autorizzati che utilizzano SCoV-2 Detect™ IgM ELISA devono utilizzarlo come indicato nell'etichettatura autorizzata. Non sono consentite deviazioni dalle procedure autorizzate, inclusi i tipi di campioni clinici autorizzati, i materiali di controllo autorizzati, altri reagenti ausiliari autorizzati e i materiali autorizzati necessari per utilizzare l'ELISA SCoV-2 Detect™ IgM ELISA.
  • I laboratori autorizzati che ricevono il test ELISA SCoV-2 Detect™ IgM devono notificare alle autorità sanitarie pubbliche competenti la loro intenzione di eseguire il test prima di iniziare il test.
  • I laboratori autorizzati che utilizzano SCoV-2 Detect™ IgM ELISA devono disporre di una procedura per la comunicazione dei risultati dei test agli operatori sanitari e alle autorità sanitarie pubbliche competenti, a seconda dei casi.
  • I laboratori autorizzati devono raccogliere informazioni sulle prestazioni di SCoV-2 Detect™ IgM ELISA e riferire a DMD/OHT7-OIR/OPEQ/CDRH (via e-mail: CDRH EUA [email protected]) e InBios
    Supporto tecnico (https://inbios.com/technical-support/) qualsiasi sospetto verificarsi di risultati falsi positivi o falsi negativi e scostamenti significativi dalle caratteristiche di prestazione stabilite.
  • Tutto il personale di laboratorio che utilizza SCoV-2 Detect™ IgM ELISA deve essere adeguatamente formato nelle tecniche di immunodosaggio e utilizzare appropriati dispositivi di protezione individuale e di laboratorio durante la manipolazione di questo kit e utilizzare SCoV-2 Detect™ IgM ELISA in conformità con l'etichettatura autorizzata. Tutto il personale di laboratorio che utilizza il test deve anche essere formato e avere familiarità con l'interpretazione dei risultati del test ELISA SCoV-2 Detect™ IgM.
  • InBios International Inc., i distributori autorizzati e i laboratori autorizzati che utilizzano SCoV-2 Detect™ IgM ELISA devono garantire che tutti i record associati a questo EUA siano conservati fino a diversa notifica da parte della FDA. Tali registrazioni saranno rese disponibili alla FDA per l'ispezione su richiesta.

a La lettera di autorizzazione si riferisce a “Laboratori certificati ai sensi dei Clinical Laboratory Improvement Amendments of 1988 (CLIA),
42 USC §263a, che soddisfano i requisiti per eseguire test di alta complessità” come “laboratori autorizzati”.

CARATTERISTICHE DI PERFORMANCE

Valutazione clinica
La concordanza percentuale positiva (PPA) di SCoV-2 DetectTM IgM ELISA è stata stimata testando un pannello di campioni di siero raccolti da 85 individui risultati positivi al test PCR aSCoV-2 in un momento precedente. Uno o più sampi le sono stati raccolti da ciascun individuo in vari momenti. La reattività è stata correlata ai giorni trascorsi dopo l'insorgenza dei sintomi ei risultati sono stati analizzati utilizzando il primo sanguinamento per intervallo (cioè ≤7, 8-14, ≥15 giorni dopo l'insorgenza dei sintomi). Dei 111 campioni forniti dagli 85 soggetti, 102 campioni sono risultati reattivi (positivi) con SCoV-2 DetectTM IgM ELISA. I risultati sono mostrati di seguito.

Riepilogo dei risultati in relazione ai giorni successivi all'insorgenza dei sintomi

Giorni dopo l'esordio dei sintomi # PCR Positivo in qualsiasi momento SCoV-2 IndividuareTM IgM ELISA
# Risultati positivi PPA IC 95%*
≤ 7 9 6 66.67% 35.42% - 87.94%
8-14 35 32 91.43% 77.62% - 97.04%
≥ 15 48 45 93.75% 83.17% - 97.85%
Sconosciuto 19 19 100% 83.19% - 100%

Concordanza percentuale complessivamente positiva per SCoV-2 DetectTM IgM ELISA

Concordanza percentuale positiva (PPA) 91.89% (102 / 111)
Intervallo di confidenza al 95%*: 85.31% – 95.68%

La concordanza percentuale negativa (NPA) di SCoV-2 DetectTM IgM ELISA è stata stimata testando un pannello di 95 campioni di siero umano normale. 94 dei 95 campioni testati non reattivi (negativi) con SCoV-2 DetectTM IgM ELISA.

Concordanza percentuale negativa complessiva per SCoV-2 DetectTM IgM ELISA

Percentuale di concordanza negativa (NPA) 98.95% (94 / 95)
Intervallo di confidenza al 95%*: 94.28% – 99.81%

*Intervallo di confidenza al 95% calcolato con il metodo Wilson.

Convalida dell'accordo clinico indipendente

L'ELISA SCoV-2 Detect™ IgM di InBios è stato testato il 2020-06-15 presso il Frederick National Laboratory for Cancer Research (FNLCR) sponsorizzato dal National Cancer Institute (NCI). Il test è stato validato contro un pannello di sample costituiti da 30 sieropositivi per anticorpi SARS-CoV-2 samples e 80 siero e plasma anticorpo-negativi sample. Ciascuno dei 30 anticorpo-positivi sampsono stati confermati con un acido nucleico ampè stato confermato che il test di lificazione (NAAT) e gli anticorpi IgM erano presenti in tutti i 30 secondiample. La presenza di anticorpi nel samples è stato confermato da diversi metodi ortogonali prima del test con SCoV-2 Detect™ IgM ELISA. La presenza di anticorpi IgM in particolare è stata confermata da uno o più metodi di confronto. Anticorpo-positivo sample sono stati selezionati a diversi titoli anticorpali.

Tutti gli anticorpi negativi sampsono stati raccolti prima del 2020 e includono: i) Settanta (70) sampselezionati indipendentemente dallo stato clinico, “Negativi” e ii) Dieci (10) samples selezionate dal siero in banca di pazienti HIV+, “HIV+”. Il test è stato eseguito da un operatore utilizzando un lotto di SCoV-2 Detect™ IgM ELISA. Gli intervalli di confidenza per sensibilità e specificità sono stati calcolati in base a un metodo di punteggio descritto in CLSI EP12-A2 (2008).

Per la valutazione della reattività crociata con l'HIV+, è stato valutato se un aumento del tasso di falsi positivi tra gli anticorpi anti-negativiampi con HIV era statisticamente più alto del tasso di falsi positivi tra quelli negativi agli anticorpiamples senza HIV (per questo, è stato calcolato un intervallo di confidenza per la differenza nei tassi di falsi positivi per un metodo di punteggio descritto da Altman). I risultati e l'analisi dei dati sono riportati nelle tabelle seguenti.

Risultati riepilogativi

SCoV-2 Individuare™ ELISA IgM Metodo comparatore Totale
Positivo (IgM)+ Negativo (IgM)- Negativo, HIV+
Positivo IgM+ 29 1 0 30
Negativo IgM- 1 69 10 80
Totale (n = 110) 30 70 10 110

Statistiche riassuntive

Misura Stimare Intervallo di confidenza
Sensibilità IgM+ (PPA) (29/30) 96.7% (83.3%; 99.4%)
Specificità IgM (NPA) (79/80) 98.8% (93.3%; 99.8%)
Sensibilità combinata (29/30) 96.7% (83.3%; 99.4%)
Specificità combinata (79/80) 98.8% (93.3%; 99.8%)
PPV combinato per prevalenza = 5% 80.3% (39.4%; 96.0%)
VAN combinato per prevalenza = 5% 99.8% (99.1%; 100%)
Reattività crociata con HIV+ (0/10) 0% non rilevato ------

Reattività crociata (specificità analitica)

La reattività crociata di SCoV-2 Detect™ IgM ELISA è stata valutata testando campioni sieronegativi SARS-CoV-2 di pazienti con anticorpi contro altre infezioni virali e autoanticorpi che potrebbero potenzialmente causare risultati falsi positivi. Centottanta siero umano normale (NHS) sampsono stati testati anche i file che sono stati raccolti negli Stati Uniti prima dell'epidemia di COVID-19 (cioè negativi noti). SCoV-2 Detect™ IgM ELISA non dimostra alcuna reattività crociata contro gli anticorpi IgM per influenza A, influenza B, epatite B, epatite C, immunodeficienza umana, virus respiratorio sinciziale o anticorpi antinucleari o fattore reumatoide o anticorpo umano anti-topo. 178 su 180 del SSN sono risultati negativi.

Categoria

Numero di sampmeno testato

Numero reattivo

Anti-influenza A/B 7

0

Anti epatite B

5 0
Anti epatite C 5

0

Anticorpo antinucleare

5 0
Fattore reumatoide 18

0

Anticorpo umano anti-topo

3 0
Anti HIV 8

0

Virus antirespiratorio sinciziale

4 0
Sieri umani normali 180

2

Riproducibilità

La riproducibilità di SCoV-2 Detect™ IgM ELISA è stata valutata facendo testare a tre operatori SCoV-2 Detect™ IgM ELISA in tre giorni diversi (totale di nove prove). Tutte le corse sono state eseguite da personale addestrato presso InBios International secondo le istruzioni per l'uso del kit ed è stato utilizzato lo stesso lotto di kit in tutte le corse. Ciascuna corsa includeva i controlli del kit (positivo, negativo e cut-off) e un pannello sierico di sette membri composto da s positivi, negativi e borderlineample. Tutti i controlli del kit e ogni membro del pannello sono stati testati in triplicato.

ogni sample è stato testato per un totale di 27 volte. Positiviamples è risultato positivo 27 volte, negativo sampè risultato negativo 27 volte.

Di seguito sono riepilogati la variabilità complessiva dei rapporti di stato immunologico (ISR) intra-corsa, tra-analisi, tra-operatore e. Perché i valori medi tendevano ad essere più bassi per i negativiampmeno, il %CV tendeva ad essere più alto, ma la % di concordanza con il risultato atteso rimaneva alta.

  In corsa (ripetibilità) Tra-corsa Tra- Operatore Riproducibilità complessiva (in laboratorio)
Sample Descrizione Media Valore N SD %CV SD %CV SD %CV SD %CV
Pannello 1 0.410 27 0.075 18.4% 0.057 13.8% 0.033 8.1% 0.100 24.3%
Pannello 2 4.226 27 0.166 3.9% 0.293 6.9% 0.449 10.6% 0.561 13.3%
Pannello 3 1.060 27 0.049 4.6% 0.090 8.5% 0.112 10.6% 0.152 14.3%
Pannello 4 0.336 27 0.056 16.7% 0.039 11.7% 0.000 0.0% 0.068 20.3%
Pannello 5 3.325 27 0.139 4.2% 0.174 5.2% 0.435 13.1% 0.488 14.7%
Pannello 6 0.316 27 0.036 11.3% 0.041 12.9% 0.033 10.5% 0.064 20.1%
Pannello 7 1.028 27 0.031 3.0% 0.088 8.5% 0.209 20.3% 0.228 22.2%

Interferenza

I potenziali interferenti nel siero umano sono stati testati a livelli fisiologicamente rilevanti o superiori per determinare se potevano causare falsi positivi o falsi negativi su SCoV-2 Detect™ IgM ELISA. Sampi le a diverse concentrazioni di anticorpi IgM anti-SARS-CoV-2 sono stati addizionati con potenziali sostanze interferenti, quindi testati in duplicato. Non è stata osservata alcuna interferenza per concentrazioni fino a 10 mg/mL di emoglobina, 0.4 mg/mL di bilirubina (coniugata o non coniugata), 15 mg/mL di trigliceridi e 4 mg/mL di colesterolo.
Di seguito sono riportati i potenziali interferenti derivati ​​dal sangue, le loro normali concentrazioni nel sangue e nel siero umani e le concentrazioni testate in questo studio.

Sostanza interferente

Concentrazione normale

Concentrazione di prova

Solvente

Emoglobina <0.01-0.05 mg/mL per siero, 110-180 mg/mL per sangue intero 10 mg/mL Sample tampone di diluizione (SDB)
Bilirubina (coniugata e non coniugata) 0.002 – 0.01 mg/mL normale, >0.025 mg/mL ittero 0.4 mg/mL 0.1N NaOH
trigliceridi <1.30-2.00 mg/ml 15 mg/mL Sample tampone di diluizione (SDB)
Colesterolo 1.70-1.90 mg/mL normale, 2.80-3.20 mg/mL elevato 4 mg/mL Alcool isopropilico (IPA)

Equivalenza di matrice

I set di matrici di 5 singoli donatori sono stati testati su SCoV-2 DetectTM IgM ELISA. Ciascun set di matrici era costituito da siero e plasma accoppiati con anticoagulante EDTA dipotassico. artificioso sampi le sono stati generati a concentrazioni mediamente positive, basse positive e negative utilizzando le stesse diluizioni sia per siero che per plasma all'interno di un set di matrici. Le aliquote sono state accecate e randomizzate per il test. Ogni aliquota è stata testata in duplicato. Testando duplicati di 3 concentrazioni per donatore e 5 donatori per matrice, sono stati ottenuti un totale di 30 risultati per matrice. Tutti sampi risultati attesi corrispondevano, con tutti i siero e plasma positivi artificialiamples test positivi e tutti negativi siero e plasma sampmeno test negativo. Pertanto, la concordanza percentuale positiva per il plasma è del 100% (20/20) e la concordanza percentuale negativa è del 100% (10/10) rispetto alla matrice di confronto corrispondente (cioè siero).

RIFERIMENTI

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Data effettiva: ##/##/2021
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Copie aggiuntive di questo foglietto illustrativo ELISA SCoV-2 Detect™ IgM possono essere ottenute online all'indirizzo www.bit.ly/cove-m. Copie cartacee sono disponibili su richiesta all'indirizzo [email protected]

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Documenti/Risorse

InBios SCoV-2 Rileva IgM ELISA [pdf] Istruzioni
SCoV-2 Rileva IgM ELISA, SCoV-2, Rileva IgM ELISA

Referenze

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